[发明专利]一种鉴定茶油掺假的引物组合物、探针、试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种鉴定茶油掺假的引物组合物、探针、试剂盒及其应用。

背景技术

茶油是原产我国的高品质木本植物食用油，湖南、江西、广西等南方省份是我国茶油主产区，深受当地人们喜爱。茶油的不饱和脂肪酸含量达90％，为联合国粮农组织推荐的最优质的保健食用植物油。茶油风味独特，耐贮藏，易被人体吸收，长期食用能降低血清胆固醇含量、起到预防和治疗高血压和常见心血管疾病的作用，还能通过油脂的深加工生产高级保健食用油和高级天然护肤化妆品等高附加值产品。然而，近年来随着供需缺口的不断增大，茶油掺假问题也日益突出，不利于我国茶油产业的健康发展。

近年来，关于植物油掺假鉴定的技术主要有色谱分析法、光谱分析法、原子转换质谱法、核磁共振法等。由于食用油的化学成分随产地、季节和品种的变化而变化，依靠分析单一化学组分很难鉴别真伪。

发明内容

针对现有的鉴定方法存在的不足，本发明提供一种鉴定茶油掺假的引物组合物、探针、试剂盒及其应用，目的是通过基于DNA分析的分子生物学方法根据不同物种具有的不同基因型对物种进行鉴定，有效避免理化方法带来的困扰。

本发明的鉴定茶油掺假的引物组合由引物对I和引物对II组成；

所述引物对I由引物F1所示序列和R1所示序列组成；

所述引物对II由引物F2所示序列和R2所示序列组成。

本发明的探针是指探针P1所示的序列。

本发明的试剂盒包括引物组合物和探针。

本发明的引物组合和探针的应用，为如下(a1)至(a3)中的任意一种：

(a1)鉴定茶油是否掺假；

(a2)鉴定茶油中的掺假含量；

(a3)制备用于茶油掺假鉴定的试剂盒。

本发明的试剂盒的用途为如下(b1)或(b2)：

(b1)鉴定茶油是否掺假；

(b2)鉴定茶油中的掺假含量。

与现有技术相比，本发明的特点和有益效果是：

本发明通过对茶油EST文库、转录组和表达谱的大量序列分析，获得了茶油的特异性基因，并设计了特异性引物。将引物进行验证实验、排他性实验，比较灵敏性、特异性等性能，最终得到用于茶油掺假鉴定的引物对I。在引物对I的基础上设计了用于用于荧光定量PCR的引物对II以及探针P1。

本发明通过提取茶油样本的基因组DNA，进行PCR扩增，通过扩增产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳进行判断，如果扩增产物中含有346bp的DNA片段，则待测样本中含有茶油，如果扩增产物中不含有346bp的DNA片段，则待测样本中不含有茶油。

进一步，本发明还可以鉴定掺假的茶油的掺假含量。

本发明是基于DNA分析的分子生物学方法，根据茶油特有的基因型进行鉴定，有效避免了理化方法带来的困扰。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中所有的定量实验，均设置三次重复实验，结果取平均值。以下实施例中，各条引物均以引物溶液形式加入至PCR反应体系中，各条引物在引物溶液中的初始浓度均为10μM。

其中：2×EasyTaq PCR SuperMix(+dye)：北京全式金公司，产品目录号：AS111。

Premix Ex Taq(Probe qPCR)：TAKARA公司，产品目录号：RR390A。

实施例1：

引物设计：

通过对茶油EST文库、转录组和表达谱的大量序列分析，获得了茶油的特异性基因，并设计了特异性引物。将引物进行验证实验、排他性实验，比较灵敏性、特异性等性能，最终得到用于茶油掺假鉴定的引物对I。在引物对I的基础上设计了用于茶油掺假鉴定的引物对II(用于荧光定量PCR)以及探针P1。

用于鉴定茶油掺假的引物对I由引物F1所示序列和R1所示序列组成(5’-3’)：

F1：AATCCTAGCACTAGCCCTCT

R1：CTCCTCTTCCCTCATCTCTC

用于茶油掺假鉴定的引物对II(用于荧光定量PCR)由引物F2所示序列和R2所示序列组成(5’-3’)：

F2：GAGGAAACAGCAGCGGCAAA

R2：GGTCGCAGCATTCGTCAAGG