[发明专利]一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法。

背景技术

板蓝根为十字花科植物四倍体菘蓝的干燥根，其性寒，味先微甜后苦涩，归心、胃经。具有清热解毒、抗菌抗病毒、预防感冒、利咽之功效；主要用于治疗舌绛紫暗、流行性脑膜炎、肺炎等疾病。板蓝根多糖是板蓝根的主要有效活性成分之一，具有多种生物活性，对特异性免疫和非特异性免疫均有一定的促进作用，是理想的免疫增强剂。它能提高机体免疫系统的功能，不仅能促进T细胞、B细胞、NK细胞、M细胞等免疫细胞的功能，还能促进白间素、干扰素等细胞因子的产生。

黄芪来自于豆科植物膜荚黄芪或蒙古黄芪的干燥根，是临床常用的中药，其主要成分黄芪多糖具有提高免疫力、抗病毒、抗菌、抗氧化、调节血糖、保肝护肾等多种药效作用。

党参为中国常用的传统补益药，具有补中益气、健脾益肺之功效。研究 表明，党参含多种糖类、酚类、甾醇、挥发油、皂甙及微量生物碱，具有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用，此外对化疗放疗引起的白细胞下降有提升作用。

目前，市场上兽用板蓝根注射液多为单方制剂，而本发明选用板蓝根、黄芪、党参共同提取而制备的复方板蓝根注射液。现有技术中常用的提取方法主要有：水提醇沉法、微波提取法、碱浸提法、酶法提取法、超滤法和超声提取等，其中水提醇沉法应用最广，然而这些从药材中直接提取的有效成分的方法存在提取率低、稳定性差、纯化难度大、操作步骤复杂、周期长等问题。

近年来利用益生菌发酵的中草药已成为研究的热点领域，目前已有乳酸菌、芽孢菌、酵母菌发酵中草药的报道。研究表明，微生物具有非常丰富的酶系统，具有强大的分解转化物质的能力，中草药被发酵后，其有效成分和活性物质被最大限度的释放出来，同时还可以产生新的活性物质。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法。

本发明采用的技术方案为：

一种兽用复方板蓝根注射液的制备方法，包括以下步骤：

（1）MRS培养基的配制和灭菌：配制MRS液体培养基，并置于灭菌柜中灭菌；

（2）东方醋杆菌的扩大培养：将东方醋杆菌接种到灭菌过的MRS液体培养基中进行扩大培养；

（3）板蓝根、黄芪、党参粗粉的制备：取一定量的板蓝根、黄芪和党参置于烘箱中烘干，然后粉碎、过筛；

（4）配制发酵培养基：配制含有板蓝根、黄芪和党参粗粉的发酵培养基，并置于灭菌柜中灭菌；

（5）接种和发酵：将扩大培养后的东方醋杆菌接种到含有板蓝根、黄芪和党参粗粉的发酵培养基中发酵；

（6）离心：将发酵得到的发酵液离心，并用水洗涤沉淀，再次离心，合并两次离心的上清液；

（7）检测：将离心后的上清液减压浓缩干燥，得干燥物，检测干燥物中的多糖成分含量；

（8）配制：取步骤（7）中的干燥物，添加适量的注射用水，再添加甘露醇，用1%的氢氧化钠溶液调节pH至5.5-6.0，加注射用水至1000ML，用0.22μm的微孔膜过滤器过滤，得兽用复方板蓝根注射液；

（9）灌封：将得到的兽用复方板蓝根注射液用拉丝灌封机灌装、封口，灌装入10ML洁净玻璃安瓿瓶中，每支灌装10.0-10.2ML；

（10）灭菌：将上述灌装封口后的药支送入蒸汽灭菌柜中于100℃蒸汽灭菌30分钟，得成品。

所述的步骤（1）中的MRS液体培养基是由下列重量份的原料制成的：酪蛋白酶消化物10份，牛肉膏粉10份，酵母膏粉4份，柠檬酸三铵2份，乙酸钠5份，七水合硫酸镁0.2份，四水合硫酸锰0.05份，磷酸二氢钾2份，葡萄糖2份，吐温-80 1份，其余为蒸馏水。

所述的步骤（1）中灭菌柜的温度是121℃，灭菌时间是20分钟。

所述的步骤（2）中扩大培养的温度是37℃，初始pH为5.7±0.2，生长周期为24-32h。

所述的步骤（3）中烘箱的温度为50℃，烘干时间为4小时，粉碎后过40目筛网。

所述的步骤（4）中发酵培养基是由下列重量份的原料组成的：胰蛋白胨4-6份，酵母粉4-6份，磷酸氢二钾1-3份，磷酸二氢钾1-3份，硫酸镁0.2-1份，黄芪粉20-30份，板蓝根粉20-30粉，党参粉10-20份，其余为蒸馏水；配制好后分装于500ML的三角瓶中，调整初始pH为6.5，于121℃灭菌15分钟。

所述的步骤（5）中东方醋杆菌的接种量为1%-3%。