[发明专利]一种菌株胞外产物的发酵生产方法

权利要求书

1.一种菌株胞外产物的发酵生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)：将斜面菌种接种于种子培养基上，并在种子罐上进行培养，温度为28～35℃，通气量为1:0.5～1:1.5vvm，罐压0.03～0.07MPa，转速为200～300rpm，培养时间72～96h；

步骤(2)：将种子培养基转接于发酵培养基进行培养，温度为26～35℃，风量为1:0.5～1:1.5vvm，罐压0.03～0.07MPa，转速为200～300rpm，培养时间168～240h；

步骤(3)：在发酵进行至48～72h，启动分离装置，含有菌株的发酵培养基透过小分子膜进入分离装置，分离装置中的第一型树脂对菌株胞外产物进行吸附；

步骤(4)：在发酵进行至48～72h，启动补料装置，流加补料培养基；

步骤(5)：当发酵结束后，向发酵罐中投加第二型树脂对菌株胞外产物进行吸附，合并第一型树脂和第二型树脂，使用乙酸乙酯进行解析。

2.根据权利要求1所述的菌株胞外产物的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述种子培养基的组成为：马铃薯淀粉0.8～2.0g/L，葡萄糖0.1～0.5g/L，酵母抽提物0.1～0.5g/L，黄豆饼粉0～1.6g/L，硫酸镁0.05～0.2g/L，大豆蛋白胨0.2～0.8g/L，玉米粉0～1.2g/L，硝酸钾0～0.06g/L，氯化钙0.05～0.2g/L，蛋白胨0～0.3g/L，CaCO₃ 0～0.5g/L，余量为水，种子培养基的pH为7.0～8.0。

3.根据权利要求1所述的菌株胞外产物的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤(2)中的发酵培养基的组成为：马铃薯淀粉0～4.0g/L，大豆蛋白胨0.1～2.0g/L，黄豆饼粉0.1～3.7g/L，玉米粉0～1.6g/L，葡萄糖0.1～0.6g/L，酵母抽提物0～0.5g/L，(NH₄)₂SO₄ 0～0.06g/L，硫酸镁0.05～0.1g/L，硝酸钾0～0.15g/L，EDTA铁钠0.001～0.003g/L，乙酸钠0.05～0.1g/L，CaCO₃0～0.5g/L，L-甲硫氨酸0.05～0.1g/L，余量为水。

4.根据权利要求1所述的菌株胞外产物的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤(3)中，启动分离装置后，维持运行时压力为0.03～0.08MPa。

5.根据权利要求1所述的菌株胞外产物的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤(5)中的第一型树脂及第二型树脂为大孔吸附树脂或者离子交换树脂。

6.根据权利要求5所述的菌株胞外产物的发酵生产方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂选自D101或XAD-16。

7.根据权利要求1所述的菌株胞外产物的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤(4)中流加补料培养基的补料压力为0.01～0.03MPa。

8.根据权利要求1所述的菌株胞外产物的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤(4)中补料培养基的组成为：马铃薯淀粉0～4.0g/L，大豆蛋白胨0.1～2.0g/L，黄豆饼粉0.1～3.7g/L，玉米粉0～1.6g/L，葡萄糖0.1～0.6g/L，酵母抽提物0～0.5g/L，(NH₄)₂SO₄ 0～0.06g/L，硫酸镁0.05～0.1g/L，硝酸钾0～0.15g/L，EDTA铁钠0.001～0.003g/L，乙酸钠0.05～0.1g/L，CaCO₃0～0.5g/L，L-甲硫氨酸0.05～0.1g/L，余量为水。

9.根据权利要求1所述的菌株胞外产物的发酵生产方法，其特征在于，所述步骤(3)中的小分子膜的过滤孔径为10～50μm。

10.根据权利要求1所述的菌株胞外产物的发酵生产方法，其特征在于，所述菌株包括埃博霉素B或者庆大霉素B。