[发明专利]一种人体精子顶体酶药盒

权利要求书

1.一种人体精子顶体酶药盒，其特征在于，所述人体精子顶体酶药盒包括底物膜、0.02％的台盼蓝或者结晶紫、pH值为4的醋酸-醋酸钠缓冲液；所述人体精子顶体酶药盒的制备和使用步骤如下：

步骤一，底物膜的制作与固定；

步骤二，采集精液标本液化后，加入5 ml离心管中以相对离心力864×g离心10 min，弃精浆，往沉淀物中加入pH为7.3的磷酸盐缓冲液2 ml，摇匀；再次以相对离心力864×g离心l0 min，弃上清液，而后将沉淀物悬浮于2倍以上体积的磷酸盐缓冲液中；

步骤三，以吸管吸取精子悬浮液50μL 滴于已纠正pH值的底物膜片上，并以吸管管身将其滚涂均匀，置37℃温箱中孵育；每例标本涂制4份，分别于30 min及1、2、3 h后取出；室温下干燥后，用0.02 ％的台盼蓝或者结晶紫染色30 s后平放于滤纸上，室温下干燥以待观察；同时也对部分底膜片在孵育前先经染色并干燥，而后涂片、孵育，涂片张数及取出时间同上述孵育后再染色的底膜片；

步骤四，以普通光镜观察，在不同放大倍数下，可见深紫蓝色底物背景，及紫黑色精子全貌；每例标本随机观察200个精子的顶体酶阳性反应数来判断阳性率，以测微尺测量反应区晕环直径大小来判断顶体酶的活性强度；

所述步骤一具体包括：

（1）取0.48 g干明胶置人三角瓶，加双蒸水4 ml，将三角瓶放入水浴锅，37℃条件下溶化成均质液；称取0.48 g干明胶置入三角瓶，加双蒸水4 ml，将三角瓶放入水浴锅，摇匀，使其溶解成透明液；制备成12％的基质液；

（2）以加样枪取该基质液 1 ml，滴于干燥、清洁的载玻片上，用另一载玻片将其推成45×25mm²大小的均质薄膜，在室温下干燥18～24 h，形成底物膜片；

（3）将已干燥的底物膜片在40％甲醛溶液中固定1 h，取出，流水冲洗20 min，垂直插入提篮或切片盒中，入4℃冰箱保存；

（4）涂片前取出底物膜片，用pH值为4的醋酸-醋酸钠缓冲液缓冲20 min，以纠正基质膜pH值；

以0.2 moL／L 的醋酸钠和 0.2 moL／L 的醋酸配制上述的醋酸-醋酸钠缓冲液。