[发明专利]一种测定金霉素效价的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析测试技术领域，具体涉及一种测定金霉素效价的方法。

背景技术

金霉素为四环素类抗生素，用于敏感金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌等革兰阳性菌及流感嗜血杆菌等敏感革兰阴性菌所致浅表眼部感染的治疗。目前，测试金霉素效价的方法有二计量法、三计量法和比浊法。其中，使用二计量和三计量法时，所用剂量浓度较高，相对检出低效价的灵敏度较低，因此，急需一种更加准确、高灵敏地金霉素效价检测方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种测定金霉素效价的方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种测定金霉素效价的方法，以蜡样芽孢杆菌为试验菌种，采用管碟法进行金霉素效价的测定，所述方法包括如下步骤：

(1)配制盐酸金霉素工作标准溶液

精密称定适量盐酸金霉素，分别配制浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.08μg/mL、0.16μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液；

(2)绘制标准曲线，获得载距a、斜率b和相关系数r的取值

以浓度为0.04μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液分别作为浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.08μg/mL和0.16μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液的参比溶液，采用管碟法进行试验，通过抑菌圈自动测量分析软件绘制标准曲线，获得所述标准曲线的载距a、斜率b和相关系数r的取值及参比溶液产生的抑菌圈直径或面积的总平均值Y_0p总；

所述管碟法具体为：针对除参比溶液外的其它四种浓度的盐酸金霉素工作标准溶液，以所述每种盐酸金霉素工作标准溶液进行管碟法试验时，至少设置三个铺有蜡样芽孢杆菌菌层培养基的培养皿，每个培养皿中间隔放置六枚钢管，交叉滴定参比溶液和该盐酸金霉素工作标准溶液，然后在30℃下培养16-18小时后，放入抑菌圈自动测量分析仪中进行测试；

(3)金霉素样品效价测定

精密称定适量金霉素样品，根据所述金霉素样品的估计效价配制金霉素浓度为0.04μg/mL的样品溶液，然后至少设置三个铺有蜡样芽孢杆菌菌层培养基的培养皿，每个培养皿中间隔放置六枚钢管，交叉滴定步骤(2)中的参比溶液和所述样品溶液，然后在30℃下培养16-18小时后，放入抑菌圈自动测量分析仪中进行测试，通过抑菌圈自动测量分析软件，获得参比溶液产生的抑菌圈直径或面积的平均值Y_0p及样品溶液产生的抑菌圈直径或面积的平均值Y_kp，通过以下公式计算金霉素样品效价：

金霉素样品效价＝C×稀释因子×10^-6×100％；

式中：C为试验过程中样品溶液中金霉素的实际浓度，计算公式为Y_kjz为校正直径或面积，计算公式为Y_kjz＝Y_0p总-Y_0p+Y_kp；稀释因子的计算公式为：稀释因子＝2.5×10⁷At，At为金霉素样品的估计效价。

进一步，步骤(1)中，所述盐酸金霉素工作标准溶液的具体配制方法为：精密称定适量盐酸金霉素，溶于浓度为0.01mol/L的HCl溶液中，配制盐酸金霉素标准储备液；以所述盐酸金霉素标准储备液为母液，pH为4.5的浓度为0.1M的磷酸盐缓冲液为稀释剂，分别配制浓度为0.01μg/mL、0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.08μg/mL、0.16μg/mL的盐酸金霉素工作标准溶液。

进一步，步骤(3)中，所述样品溶液的具体配制方法为：先将金霉素样品充分研磨，过100目筛，然后精密称定适量金霉素样品，加入萃取液中，密封，磁力搅拌或超声30分钟后调pH为≤1.2，经过滤后，以pH为4.5的浓度为0.1M的磷酸盐缓冲液为稀释剂，配制出金霉素浓度为0.04μg/mL的样品溶液。

进一步，所述萃取液为浓度为4mol/L的HCl、丙酮和纯化水按体积比1:13:6混合后形成的混合液。

进一步，所述管碟法中使用的培养皿规格为：Φ90×16-17mm；钢管规格为：内径为6.0±0.1mm，高为10.0±0.1mm