[发明专利]一种PKP2基因突变检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明公开了一种PKP2基因突变检测试剂盒，包括用于特异性扩增PKP2基因上R158K、Q211X、L419S和N852fsX930多态性位点的引物对，所述引物对包括公共上游引物和分型下游引物，所述分型下游引物包括野生型特异引物和突变型特异引物。上述PKP2基因突变检测试剂盒的检测方法包括：对样品中的PKP2基因的4个多态性位点的同时扩增采用聚合酶链式反应，其扩增产物的检测采用高效液相色谱、多重荧光毛细管电泳或聚丙烯酰氨凝胶电泳。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种PKP2基因突变检测试剂盒。

背景技术

致心律失常性右心室心肌病(arrhythmogenic right ventricularcardiomyopathy/dysplasia，简称ARVC/D)是一种以纤维、脂肪组织进行性取代心肌组织的常染色体显性遗传病，伴有不完全外显，由此导致右心室扩大及起源于右心室的室性心律失常，可表现为心悸、晕厥、心力衰竭甚至猝死，是青少年心源性猝死的主要原因之一，特别是运动性猝死。

目前认为，ARVC/D是一种遗传性桥粒心肌疾病。通过一系列的病理生理改变，最终导致临床心律失常、心力衰竭及猝死。PKP2基因编码的PKP2蛋白是桥粒蛋白的重要组成成分，其结构的改变会影响到桥粒的功能。PKP2基因内含子及外显子突变均有可能影响PKP2蛋白的结构。

目前，临床上对于遗传性心肌病的常规诊断技术，主要有影像学检查和实验室检查两大类。就影像学检查一般包含心脏彩超、心脏 CT和心脏核磁共振。这些虽然能较为准确地判断心室壁厚度，心腔大小等客观指标，但也只能是粗略地判断患者是否患有遗传性心肌病，而不能精确、特异性对遗传性心肌病的具体种类等做出确切判断。实验室检查，主要包含传统生化指标的检测，如心肌肌钙蛋白、心房钠尿肽等，仅能反映心脏损伤，不能对遗传性心肌病的具体类型及其基因突变情况进行区分。如采用分子生物学的方法辅助临床诊断，那就可以大大降低患者的损伤性、提高患者的依从性。

同时，传统的基于Sanger测序的基因检测方法存在通量低的弊端，一次反应只能检测一个扩增区域，无法满足庞大的基因检测区域和多样本检测时效性的要求。因此，有必要寻求一种新的检测致心律失常性右心室心肌病(ARVC/D)基因突变的方法，提高诊断准确性，降低成本和劳动强度并提高时效性

发明内容

本发明提供一种高准确性、低成本、高通量、快速的检测试剂盒，可用于检测与致心律失常性右心室心肌病(ARVC/D)相关的PKP2基因的突变类型。

一种PKP2基因突变检测试剂盒，包括用于特异性扩增PKP2基因上R158K、Q211X、L419S和N852fsX930多态性位点的引物对，所述引物对包括公共上游引物和分型下游引物，所述分型下游引物包括野生型特异引物和突变型特异引物，对应4个多态性位点的公共上游引物、野生型特异引物和突变型特异引物序列如SEQ ID NO: 1～12所示。

其中，序列如SEQ ID NO: 1、4、7、10所示的公共上游引物的 5'端标记有荧光标记染料，所述荧光标记染料选自FAM、HEX、TAMRA、 ROX、Cy3、Cy5、JOE、VIC、PET。

所述PKP2基因突变检测试剂盒还包括基因序列对照模板，所述基因序列对照模板包括正常序列模板SEQ ID NO: 13～14，以及突变序列模板SEQ ID NO: 15～16。

所述PKP2基因突变检测试剂盒还包括PCR缓冲液、热启动Taq 酶、超纯水、荧光分子量内标和等位基因分型标准物。

上述PKP2基因突变检测试剂盒的检测方法包括：对样品中的 PKP2基因的4个多态性位点的扩增采用聚合酶链式反应，其扩增产物的检测采用高效液相色谱、多重荧光毛细管电泳或聚丙烯酰氨凝胶电泳。