[发明专利]一种微卫星不稳定检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子诊断领域，具体而言，涉及一种微卫星不稳定检测的方法。

背景技术

结直肠癌(carcinoma of colon and rectum，CRC)是一种常见的严重危害人类健康的恶性肿瘤。随着人类社会的发展，人们的生活方式和生存环境发生了改变，生活压力日益增大，生存环境的污染日益严重，致使近年来结直肠癌的发病率呈现明显的上升趋势，而且发病年龄呈现年轻化态势。遗传性结直肠癌在结直肠癌体系中占重要比例，其具有遗传性、高发性、多发性和肿瘤发生的多器官性等特征，临床上依据有无多发性息肉病，将遗传性结直肠癌分为遗传性息肉病和遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)两大类，两类遗传性结直肠癌皆为常染色体显性遗传。据报道，遗传性非息肉病性结直肠癌约占结直肠癌的15％左右。

结直肠癌从发生机制上分为染色体不稳定和微卫星不稳定两种类型。微卫星是遍布人类基因组中的短串联重复序列。微卫星不稳定(Microsatellite Instability，MSI)是指由于缺失或插入重复单位引起肿瘤的DNA与同一个体的正常胚系DNA相比微卫星长度发生改变，即产生异常长度的等位基因。研究表明，15％结直肠癌是经MSI途径发生，MSI是由于错配修复基因发生缺陷引起，而遗传性非息肉性大肠癌(HNPCC)是由错配修复基因胚系突变所致的显性遗传病，90％以上的典型HNPCC患者具有MSI特征。另外，也有15％左右的散发性结直肠癌患者具有MSI特征。MSI的HNPCC发生的主要原因是生殖细胞的错配修复(mismatch repair，MMR)基因突变。hMLHl，hMSH2，hMSH6和hPMS2等任何一个或几个错配修复基因的失活都能导致MSI发生，散发结直肠癌病人多数仅有错配修复基因体细胞突变。

1997年，MSI国际研究合作组织在针对肿瘤的微卫星不稳定及复制错误表型检测的国际会议制定了统一的MSI检测标准，即Bethesda Guidelines。该标准明确MSI检测的参考检测位点，包括两个单核苷酸重复单元的微卫星位点(BAT-25和BAT-26)和三个二核苷酸重复单元的微卫星位点(D2S123，D5S346和D17S250)。应用本标准检测肿瘤样本的MSI状态时，5个微卫星位点如果检测出2个或者2个以上的位点发生改变，则被称为MSI-H型，即高频度微卫星不稳定，MSI-H型肿瘤表选出特有的临床及病理学表型。5个微卫星位点如果只检测出一个位点发生改变，则被称为MSI-L型，即低频度微卫星不稳定。5个微卫星位点都没有发生改变，则被称为MSS型，即微卫星稳定型。通常，由于MSI-L型和MSS型的临床表现无明显差别，所以将MSI-L型划入MSS型。

MSI结直肠癌与MSS结直肠癌相比，在预后和治疗等方面具有显著的差异，MSI结直肠癌检测临床意义包括预后性，预测性和HNPCC的辅助诊断和筛查三个方面。MSI-H II期结直肠癌5年无复发生存率高于MSS II期结直肠癌。即在II期结直肠癌患者中，MSI-H状态提示良好预后。5-氟尿嘧啶是结直肠癌术后辅助治疗的重要化疗药物。MSH-H II期结直肠癌患者有良好的预后但不能从5-氟尿嘧啶治疗中获益。从MSI-H结直肠癌中筛选出来的患者，就个人而言早期诊断和预防性息肉切除术可以降低CRC死亡率。此外，还可以为患者家族成员提供肿瘤预防和筛查。所以临床上已将MSI作为结直肠癌预后和制定辅助治疗方案的重要分子标记物，并协助HNPCC的筛选。在2011年关于结直肠癌筛查的National Comprehensive Cancer Network指南中，已经将MSI检测列入必要检测项目。2017年5月，美国食品药品监督管理局(Food and Drug Administration，FDA)破天荒宣布“加速批准PD-1抗体用于确定有高频度微卫星不稳定或者错配修复基因缺陷的成人和儿童晚期或者转移性实体肿瘤患者”。FDA批文中明确规定只有高频度微卫星不稳定或错配修复基因缺陷的患者才能有较高的概率从PD-1(programmed death 1)抗体中获益，权威数据表明在用PD-1抗体治疗前，先要做MSI检测，因为只有MSI-H型病人，接受PD-1抗体治疗，有效率才比较高，MSS型病人，有效率很低甚至极低。