[发明专利]一种用于乙型肝炎病毒检测的核酸序列及试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)的核酸序列及试剂盒，属于分子诊断技术领域。本发明提供的检测HBV的引物及探针能特异地扩增并检测A‑I 9个HBV基因型的病毒DNA。本发明还公开了用于检测乙型肝炎病毒的试剂盒，能实现快速、灵敏、准确的检测HBV病毒各种亚型的准确拷贝数。本发明具有操作简便、特异性强、敏感性高、成本低廉及高通量等优点，可用于临床HBV病毒DNA的快速超敏检测，为临床慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)的诊断和治疗提供参考依据。

技术领域

本发明属于分子诊断技术领域，具体涉及一种用于乙型肝炎病毒检测的核酸序列及试剂盒。

背景技术

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，简称乙肝病毒或HBV)是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科(hepadnaviridae)。根据目前所知，HBV就只对人和猩猩有易感性，引发乙型病毒性肝炎疾病。慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)是由于HBV在人肝细胞中慢性感染所致的一种肝脏炎症疾病，并可引起多器官损害的一种疾病。主要侵犯儿童及青壮年，其持续进展可导致肝硬化、肝功能衰竭及肝癌。CHB广泛流行于世界各国，据估计，全球有超过2.4亿人慢性感染乙型肝炎(乙肝表面抗原阳性持续至少6个月)。每年有超过68.6万人死于乙型肝炎并发症，包括肝硬化和肝癌。乙型肝炎是影响卫生工作者的一大职业危害。因此，它已成为严重威胁人类健康的世界性疾病，也是我国当前流行最为广泛、危害性最严重的一种疾病。乙型病毒性肝炎无一定的流行期，一年四季均可发病，但多属散发。近年来乙肝发病率呈明显增高的趋势。中国HBV感染人数超过7亿，其中有约1.2亿携带者，超过2000万慢性感染者，且每年新增HBV感染人数约50万，是世界上HBV感染率最高的国家之一。

目前对于CHB患者最主要的治疗措施是抗病毒治疗，目前应用最广泛的一类药物是核苷(酸)类似物(包括拉米夫定、阿德福韦酯、替比夫定、恩替卡韦、替诺福韦酯等)，以及干扰素等其他药物。而抗病毒治疗的疗效监测及诊疗方案的修订则需要对患者血清中的HBV病毒载量进行检测，也就是准确定量患者血中HBV DNA的拷贝数。在国内外CHB治疗指南中均指出，无论是采用何种抗HBV治疗方案，均需要采用HBV DNA定量检测试剂及方法对抗HBV疗效进行评估，将CHB患者外周血中的HBV DNA控制在现有检测手段检测不到的水平。HBV DNA定量检测试剂是指利用包括实时荧光聚合酶链反应(polymerase chainreaction，PCR)或其他的分子生物学方法在内的核酸检测技术，以HBV基因序列为检测靶标，对人血清、血浆及其他人体样本中的HBV DNA进行体外定量检测的试剂。结合临床表现和其他实验室指标，可作为乙型肝炎辅助诊断的指标之一，还可通过对血液中HBV DNA浓度的检测可用于HBV感染的辅助诊断、治疗适应症的选择及抗病毒疗效的判断。目前，国内外进行HBV DNA定量检测采用的最常见也是最主流的方法均为实时荧光定量PCR方法。中国CFDA于2013发布的《乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸定量检测试剂注册技术审查指导原则》中建议HBV DNA定量检测试剂的最低检出限应不高于30IU/mL。美国肝病协会指出，在抗HBV治疗中，HBV DNA定量水平应尽可能小于或等于10IU/mL，欧洲肝病研究协会则指出，将HBVDNA定量水平控制在10-15IU/mL可有效防止疾病复发。超敏检测HBV DNA有助于随时监测低病毒复制HBV患者的诊断和抗病毒治疗效果的监测。