[发明专利]一种产棘白菌素B的基因工程菌及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种产棘白菌素B的基因工程菌及其构建方法和应用。该基因工程菌的基因组中的杂色曲霉素合成相关的聚酮合酶基因被失活或者对该基因进行基因修饰以使其不表达杂色曲霉素。该基因工程菌的构建过程无需对菌株进行单核处理，从而避免了通过同源重组发生单交换、遗传稳定性差以及易发生回复突变等问题；该基因工程菌不产生杂色曲霉素，且棘白菌素B产量较野生菌株可提高44％，并且经过多次传代，发酵性状仍维持稳定。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种产棘白菌素B的基因工程菌及其构建方法和应用。

背景技术

棘白菌素B(Echinocandin B，ECB)作为天然环脂肽类化合物，具有较强的抗真菌作用。在其基础上进行侧链修饰后获得的阿尼芬净在2006年被FDA批准用于真菌感染的治疗，具有低毒、高安全性、广谱的优势，市场前景良好。

棘白菌素B可以通过德拉克洛瓦曲霉(Aspergillus delacroxii)NRRL3860(＝Asp.nidulans var.echinulatus，此为以前文献中标识的菌种名)(Benz F,Knüsel F,Nüesch J,Treichler H,Voser W,Nyfeler R,Keller-Schierlein,W.Stoffwechselproduktevon Mikroorganismen 143.Mitteilung.Echinocandin B,ein neuartiges Polypeptid-Antibioticum aus Aspergillus nidulans var.echinulatus:Isolierung undBausteine.Helv Chim Acta.1974；57(8):2459–77；CIBA GEIGY AG.Antifungalantibiotic A32204 production by aerobic cultivation of Aspergillus nidulansvar.echinulatus A32204.Swiss patent 568386.1975；Samson RA,Visagie CM,Houbraken J,Hong SB,Hubka V,Klaassen CHW,Perrone G,Seifert KA,Susca A,TanneyJB,et al.Phylogeny,identification and nomenclature of the genusAspergillus.Stud Mycol.2014；78:141–73.)、厚冠突曲霉(Aspergilluspachycristatus)NRRL 11440(＝Asp.nidulans var.roseus NRRL 11440)、皱褶曲霉(Aspergillus rugulosus)和构巢曲霉(Aspergillus nidulans)NRRL 8112(＝Emericellanidulans DSM 946)等菌株发酵产生，但是这些Aspergillus sp.会产生大量杂色曲霉素。杂色曲霉素与黄曲霉素结构类似，具有相似的生物毒性，其主要污染玉米、花生、大米和小麦等谷物，尽管污染范围和程度不如黄曲霉毒素，然而在肝癌和食管癌高发地区居民所使用的食物中，杂色曲霉素污染较为严重。且由于杂色曲霉素具有极强的致癌毒性，在实际生产操作中对人体健康也极为不利。