[发明专利]一种产棘白菌素B的基因工程菌及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201710944222.2 | 申请日： | 2017-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN109593661B | 公开（公告）日： | 2022-10-04 |
| 发明（设计）人： | 胡海峰;闵涛玲 | 申请（专利权）人： | 上海医药工业研究院;中国医药工业研究总院 |
| 主分类号： | C12N1/15 | 分类号： | C12N1/15;C12N15/80;C12P21/04;C12R1/66 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 薛琦;朱水平 |
| 地址： | 200040 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 产棘白 菌素 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种产棘白菌素B的基因工程菌，其特征在于，其基因组中的杂色曲霉素合成相关的聚酮合酶基因stcA被失活或者对该基因进行基因修饰以使其不表达杂色曲霉素，所述基因工程菌为德拉克洛瓦曲霉(Aspergillus delacroxii)NRRL 3860。
2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因修饰为基因中碱基的增添、替换或者缺失，所述缺失的碱基个数至少为1bp。
3.如权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述缺失的碱基个数至少为100bp。
4.如权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述缺失的碱基的核苷酸序列具有序列表中SEQ ID NO:1所示的序列。
5.一种生产棘白菌素B的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)培养如权利要求1～4任一项所述的基因工程菌以产生含有棘白菌素B的发酵产物；
(2)从步骤(1)所得发酵产物中分离出棘白菌素B。
6.一种如权利要求1～4任一项所述产棘白菌素B的基因工程菌的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括下述步骤：
(1)构建敲除质粒，所述敲除质粒依次含有以下元件：杂色曲霉素合成相关的聚酮合酶基因stcA的左、右同源臂序列；所述敲除质粒缺失杂色曲霉素合成相关的聚酮合酶基因stcA；
(2)将步骤(1)所得敲除质粒转化至农杆菌(Agrobacterium)中；
(3)将步骤(2)所得农杆菌的菌液与产棘白菌素B以及杂色曲霉素的菌株的孢子液混合；筛选所述左、右同源臂序列与所述菌株的基因组发生同源重组的菌株。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述敲除质粒的骨架为pDHt-sk；
步骤(1)中所述的敲除质粒在所述左、右同源臂序列之间含有筛选基因；
步骤(1)中所述左、右同源臂序列的长度为1500～5000bp；
和/或，步骤(2)中所述农杆菌为根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)AGL1。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述筛选基因为潮霉素基因、寡霉素基因、博来霉素基因、腐草霉素基因或者卡那霉素基因。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述左、右同源臂序列的核苷酸序列分别如序列表中SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海医药工业研究院;中国医药工业研究总院，未经上海医药工业研究院;中国医药工业研究总院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710944222.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
