[发明专利]一种通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法在审
| 申请号： | 201710881654.3 | 申请日： | 2017-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN109554454A | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 李晓宁;明磊国;董玲娟 | 申请（专利权）人： | 东莞自然衡健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6876 | 分类号： | C12Q1/6876;G01N33/68 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 523808 广东省东莞市松山湖高新技术产业开*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 冻干粉 毛囊 含量评价 细胞因子 生发 细胞培养 毛发再生作用 生物工程领域 细胞共培养 细胞 后续产品 体外评价 有效评价 上清液 可用 制备 质检 发育 检测 | ||
1.一种一种通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）获取冻干粉和毛囊相关表皮成分及真皮成分干细胞；
2）冻干粉作用于毛囊相关细胞：用培养液溶解冻干粉，按照一定浓度作用于上述1）中的表皮成分及真皮成分干细胞；
3）细胞及上清液收样与检测：上述冻干粉作用24-48h后，分别收集细胞上清液和细胞，用ELISA检测试剂盒和qRT-PCR的方法，在基因水平和蛋白水平分别测定上清液和细胞中干细胞生长因子（Stem Cell Factor，SCF）、肝细胞生长因子（Hepatocyte Growth Factor，HGF）、血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）等至少一种细胞因子的表达量变化。
2.根据权利要求1所述的通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法，其特征在于，在步骤2）之前，所述方法还包括：
冻干粉的制备：培养间充质干细胞，收集细胞条件培养液，通过两次浓缩、液体蛋白含量测定后，按照含量测定结果添加冻干保护剂，使用冷冻干燥机进行冻干，得到间充质干细胞冻干粉。
3.根据权利要求1所述的通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法，其特征在于，在步骤2）之前，所述方法也包括：
毛囊相关细胞的培养：分别培养人毛囊表皮成分及真皮成分干细胞，作为评价细胞，用于检测冻干粉活性。
4.根据权利要求1所述的通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法，其特征在于，所述权利要求2中的间充质干细胞可以是人脐带间充质干细胞或人脂肪间充质干细胞的一种。
5.根据权利要求1所述的通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法，其特征在于，所述权利要求3中的毛囊表皮成分细胞为人毛囊干细胞，可以是人毛囊内根鞘干细胞或外根鞘干细胞的一种。
6.根据权利要求1所述的通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法，其特征在于，所述权利要求3中的毛囊真皮成分细胞可以是人毛乳头干细胞或人成纤维干细胞的一种。
7.根据权利要求1所述的通过测定细胞因子含量评价冻干粉生发作用的方法，其特征在于，所述步骤2中溶解冻干粉的培养液与权利要求3中用于培养细胞的培养液一致。
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