[发明专利]循环肿瘤细胞捕获并进行全基因转录组检测的方法

权利要求书

1.一种捕获及对循环肿瘤细胞进行转录组分析的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)富集循环肿瘤细胞，单细胞捕获并包装入乳滴，生成包含单细胞的油包水乳滴；

(2)对乳滴内单细胞建立RNA-seq文库，测序；

(3)进行转录组分析。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，富集循环肿瘤细胞包括：根据循环肿瘤细胞的物理特性进行初步富集，或，根据循环肿瘤细胞的生物特性进行初步富集，获得经富集循环肿瘤细胞的样本。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，富集循环肿瘤细胞包括：对样本去除红细胞，并通过CD45+磁珠阴性富集，排除细胞表面带有CD45标记的白细胞，获得经富集循环肿瘤细胞的样本。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，获得经富集循环肿瘤细胞的样本后，采用1×PBS以及0.1％BSA混合液进行稀释，使其到达终浓度2500±300个细胞/微升。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，稀释后，还包括：将权利要求4获得的样本，利用单细胞微流控芯片进行单细胞捕获，与细胞裂解反应液、RNA反转录引物、扩增酶以及细胞标签混合，分装入乳滴；每个包含单细胞的乳滴均带有不同的细胞标签。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，其中，所述的细胞标签是单个细胞特异性的，用于区分不同的单个细胞；较佳地，所述的细胞标签是Cell Barcode。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，建立RNA-seq文库包括：

(i)将包含单细胞的油包乳滴中的细胞进行裂解反应，反转录得第一链cDNA；

(ii)合成第二链cDNA，进行片段化、扩增、纯化，生成测序文库。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(ii)中，获得第一链cDNA之后，还包括进行乳滴破碎的步骤，之后再合成第二链。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，在生成测序文库后，进行测序分析，根据不同的标签，对单个循环肿瘤细胞进行单独的转录组分析。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的转录组分析包括：根据标签区分的单个循环肿瘤细胞转录组信息，进行基因表达量、基因突变分析，获取单个循环肿瘤细胞转录组特征；较佳地，还包括：依据已知不同细胞的转录组特征，区分所述单个循环肿瘤细胞的来源和/或的病理特性。