[发明专利]一种骨瓜提取物注射液制备方法及相应的药物组合物

权利要求书

1.一种骨瓜提取物注射液的的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)骨原料和甜瓜籽的前处理；

(2)骨多肽提取液的制备；

(3)甜瓜籽多肽提取液的制备；

(4)骨瓜提取物溶液的制备；

(5)骨瓜提取物注射液的制备；

其中，

步骤(1)所述的骨原料和甜瓜籽的前处理步骤为：

取检疫合格的骨原料，用刀剔去残肉，断开去脂，用水冲洗，控去水分，砸碎，所述的骨原料为猪四肢骨；

取甜瓜籽用水冲洗，控去水分，粉碎，所述的甜瓜籽为葫芦科植物甜瓜的干燥成熟种子；

步骤(2)所述的骨多肽提取液的制备的方法为：

1)前处理后的骨渣置加热锅中，按1:1量加注射用水，121℃热压60分钟，2～3层纱布过滤，残渣同法再次提取2次，合并三次滤液；

2)低温静置，撇去油脂；

3)加热至20～30℃，用2mol/L的盐酸调整pH值至3.0～3.5，煮沸后保持沸腾状态30分钟，随后静置12～24小时；

4)取上清液，相对截留分子量30万道尔顿的中空纤维柱过滤，滤液用5mol/L的NaOH溶液调节pH8.5～9.0，加热煮沸，冷却，-35～-25℃速冻一周以上；

5)自然缓化或常温水浴至20～30℃，取上清液用2mol/L盐酸调节pH值至6.0～6.5，所述上清液中，以牛血清白蛋白计量的多肽类物质浓度为2～5mg/ml；

6)将调节好pH值的上清液经XAD-1180大孔吸附树脂以1.2～1.5BV/h流速通过大孔吸附树脂；随后：

Ⅰ用大孔吸附树脂1倍量的纯化水冲柱，

Ⅱ用1倍量的60％乙醇浸泡树脂30分钟，

Ⅲ用3倍量80％乙醇以1.0～1.2BV/h流速洗柱，

Ⅵ合并60％乙醇浸泡液和80％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩；

浓缩液中的骨多肽含量为7～12mg/ml，以牛血清白蛋白计；

7)-25～-15℃冷冻储存所述的多肽提取液；

步骤(3)所述的甜瓜籽多肽提取液的制备方法为：

1)前处理后的甜瓜籽粉碎物置加热锅中，按1:1量加注射用水，121℃热压30分钟，2～3层纱布过滤，残渣同法再次提取2次，合并三次滤液；

2)用2mol/L的盐酸调整pH值3.0～3.5，煮沸后保持沸腾状态30分钟，随后静置12～24小时；

3)取上清液，相对截留分子量30万道尔顿的中空纤维柱过滤，滤液用5mol/L的NaOH溶液调节pH8.5～9.0，加热煮沸，冷却，-35～-25℃速冻一周以上；

4)自然缓化或常温水浴至20～30℃，取上清液用2mol/L盐酸调节pH值至6.0～6.5，所述上清液中，以牛血清白蛋白计量的多肽类物质浓度为2～5mg/ml；

5)将调节好pH值的上清液经XAD-1180大孔吸附树脂以1.2～1.5BV/h流速通过大孔吸附树脂，随后，

Ⅰ用大孔吸附树脂1倍量的纯化水冲柱，

Ⅱ用1倍量的60％乙醇浸泡树脂30分钟，

Ⅲ用3倍量80％乙醇以1.0～1.2BV/h流速洗柱，

Ⅵ合并60％乙醇浸泡液和80％乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩，

浓缩液中甜瓜籽多肽含量为7～12mg/ml，以牛血清白蛋白计；

6)-25～-15℃冷冻储存所述的多肽提取液；

步骤(4)所述的骨瓜提取物溶液的制备的步骤为：

1)将冷冻的骨多肽提取液、甜瓜籽多肽提取液解冻，按骨多肽与甜瓜籽多肽的重量比2：1混合；

2)用相对截留分子量1万道尔顿的超滤器超滤，检验多肽含量，药液放入冷库，-25～-15℃冷冻储存；

步骤(5)所述的骨瓜提取物注射液的制备步骤为：

1)浓配：将步骤(4)获得的骨瓜提取物溶液解冻，倒入浓配罐加入所需的注射用水，搅拌10分钟；

2)稀配：骨瓜提取物溶液打入稀配罐，加注射用水至配置量，药液搅拌10分钟以上，得注射液中间品；

3)灌封：将检测合格后的注射液中间品进行除菌过滤，滤器孔径为0.22μm，将滤液打入除菌暂存罐，保持在20℃以下并进行灌封；

4)灭菌：121℃灭菌30分钟；

5)灯检、贴签、包装、入库。