[发明专利]一种分泌抗赭曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明提供了一种分泌抗赭曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株F‑3‑3，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14303。此细胞株分泌的抗赭曲霉毒素单克隆抗体灵敏度高、特异性好、抗干扰性好，对赭曲霉毒素A的50％抑制浓度IC₅₀为0.990μg/L，对中药中可能存在的真菌毒素、农药、重金属、炮制过程中使用的辅料及污染菌等均具有较好的抗干扰性，为中药中赭曲霉毒素A的免疫检测提供了条件，具有实际应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种分泌抗赭曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

中药材从生产、采收、加工、运输、贮藏等过程均有可能因自身性质与外界因素的影响而污染真菌，进而发生霉变并污染真菌毒素。霉变不仅会影响中药材的质量，使药材失去原有的药用价值，造成巨大的经济损失，而且在霉变过程中，产生的多种真菌毒素会对患者的肝、肾、神经和造血系统等造成严重的损害，甚至可能诱发癌症。同时，随着当今中医药保健养生观念的普及，越来越多“药食同源”的大宗中药材被用于人们日常的饮食和保健当中，市场的需求量大，若这些中药材受到真菌毒素的污染，则势必会危害更多的人群的健康，加重个人和医疗系统的经济负担，更有可能进一步影响社会的和谐和稳定。

赭曲霉毒素(ochratoxin)是曲霉菌属和青霉菌属等产毒菌株产生的二级代谢产物，包括赭曲霉毒素A(OTA)、赭曲霉毒素B(OTB)、赭曲霉毒素C(OTC)、赭曲霉毒素D(OTD)、OTA的甲酯以及OTB的甲酯和乙酯等7种结构类似的化合物，均为异香豆素联结L-苯丙氨酸的衍生物。赭曲霉毒素对农作物的污染在全球范围内都比较严重，其中以赭曲霉毒素A在自然界分布最广，污染水平最高，且毒性最强，不仅有致畸、致突变和致癌等作用，还具有免疫毒性、肝毒性和肾毒性，并被认为与巴尔干地方性肾病有关，因此与人类健康的关系最为密切。国际癌症研究机构(IARC)在1993年将其定为2B类致癌物。由于赭曲霉毒素的危害严重，引起了各国的普遍重视。

OTA的含量通常很低，所以检测手段要求较高。目前，用于测定OTA的方法有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)等色谱法，其与质谱和核磁共振联用技术正逐渐被用于十分特殊的测定和确定多种真菌毒素。这些方法检测准确、检测限低，但需要复杂的样品前处理过程、专门的仪器以及专业的人员培训，在实际应用中受到了很大的限制。

免疫分析法可以弥补以上所有缺点，免疫分析法是一种利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质的分析方法，建立小分子化合物的免疫分析方法的关键是能够制造出对小分子化合物具有高亲和力和高特异性的抗体。

发明内容

本发明的目的是提供一种分泌抗赭曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该细胞株制备的单克隆抗体对OTA具有较好的特异性和较高的检测灵敏度，对中药中可能存在的真菌毒素、农药、重金属、炮制过程中使用的辅料及污染菌等均具有较好的抗干扰性，为建立中药中OTA的免疫学检测方法奠定基础。

本发明的技术方案，一种分泌抗赭曲霉毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为赭曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株F-3-3，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14303，保藏日期为2017年06月15日。

抗赭曲霉毒素单克隆抗体，其是由保藏编号为CGMCC No.14303的赭曲霉毒素单克隆抗体杂交瘤细胞株F-3-3分泌产生的，所述抗赭曲霉毒素单克隆抗体应用于中药中赭曲霉毒素A的分析检测。

本发明提供F-3-3细胞株的基本制备过程：