[发明专利]一种利用复配菌剂制备絮凝剂的方法

权利要求书

1.一种利用复配菌剂制备絮凝剂的方法，所述复配菌剂为海洋盐单胞菌菌株Halomonas sp.GHF11与海洋冷杆菌菌株Psychrobacter sp.GHF2，包括以下步骤：

(1)将海洋盐单胞菌菌株Halomonas sp.GHF11与海洋冷杆菌菌株Psychrobactersp.GHF2的菌种分别接种到固体培养基上培养，加入无菌水制成GHF11菌种液与GHF2菌种液；

(2)混合两种菌种液得到混合菌液，然后接种到液体培养基中发酵培养制成发酵菌液；

(3)向发酵菌液中加入絮凝载体并继续发酵培养得到原料液；

(4)向原料液中加入乙醇静置沉降，然后离心分离沉降物，经干燥后制成絮凝剂；

所述海洋盐单胞菌菌株Halomonas sp.GHF11的保藏编号为CGMCC No.：14510；所述海洋冷杆菌菌株Psychrobacter sp.GHF2的保藏编号为CGMCC No.：14509；

步骤(2)中GHF11菌种液与GHF2菌种液混合的体积比为0.5～2:1，混合菌液的接种浓度为1.5～2.5mL混合菌液/100mL液体培养基，发酵培养温度23～27℃、时间3～5天；

步骤(3)中絮凝载体的加入量为8～15g/100mL发酵菌液，继续培养1～2天；

所述的液体培养基经以下过程制成：

a.将贝类海鲜产品用水清洗干净，按质量比贝类海鲜产品:水＝1:2～4加水在120～122℃高压蒸煮100～120分钟得到蒸煮肉汤；

b.蒸煮肉汤降温至50～60℃，加入枯草杆菌蛋白酶、菠萝蛋白酶酶解8～12小时，两种蛋白酶添加后的质量浓度为4‰～8‰，然后经400～500目筛网过滤得到酶解液；

c.在95～100℃下持续加热酶解液使体积浓缩30％～50％得到浓缩液；

d.向100mL浓缩液中加入磷酸氢二钾0.8～1.4g、葡萄糖25～45g溶解均匀，然后加入陈化海水定容到1L，经高压灭菌制成液体培养基；

固体培养基为向1L液体培养基中加入15～20g的琼脂凝固制成的斜面培养基；

步骤(1)中海洋盐单胞菌菌株Halomonas sp.GHF11培养温度25～30℃，海洋冷杆菌菌株Psychrobacter sp.GHF2培养温度18～23℃，培养时间36～48小时，无菌水与固体培养基的体积比1.0～1.5:1。

2.根据权利要求1所述的利用复配菌剂制备絮凝剂的方法，其特征在于，贝类海鲜产品包括蛤仔、蛏子、蚬子、海虹、扇贝与贻贝中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的利用复配菌剂制备絮凝剂的方法，其特征在于，步骤(2)中摇床转速100～160r/min。

4.根据权利要求1所述的利用复配菌剂制备絮凝剂的方法，其特征在于，所述絮凝载体为沙土、泥沙、海沙、硅藻土、活性炭、贝壳粉、生物炭、壳聚糖和膨润土中的一种或几种，所述絮凝载体经200～300目筛网过筛后灭菌使用。

5.根据权利要求1所述的利用复配菌剂制备絮凝剂的方法，其特征在于，步骤(4)中乙醇与原料液的体积比为2～4:1，在1～5℃静置6～10小时，离心速率3000～5000r/min，干燥温度为90～105℃，干燥时间1～2小时。