[发明专利]竹叶椒药材中生物碱类成分的测定方法

权利要求书

1.一种竹叶椒药材中生物碱类成分的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：

分别精密称取Isodecaline对照品、6–acetonyldihydrochelerythrine对照品、N-Methylanhydrotetrahydroberberrubine A对照品、escholidine perchlorate对照品、别隐品碱对照品，白鲜碱对照品和盐酸小檗碱内标化合物，精确吸取乙醇或甲醇，超声溶解，摇匀，制得对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：

竹叶椒药材供试品溶液的制备：精密称取一定质量竹叶椒药材，置于锥形瓶中，加入提取溶剂，超声提取，放冷，称重，加入相同提取溶剂补重，摇匀，离心，取上清液，即得竹叶椒药材供试品溶液；

(3)UFLC-MS/MS检测：

吸取步骤(1)对照品溶液，依次稀释成6个不同浓度的对照品溶液，分别注入UFLC-MS/MS系统进行分析制定标准曲线；然后取步骤(2)供试品溶液注入UFLC-MS/MS系统，根据标准曲线计算供试品溶液中生物碱含量；

其中，UFLC条件为：采用C₁₈反相色谱柱，流动相A为0-0.1‰甲酸水溶液，B为含0-0.1‰甲酸的乙腈溶液；梯度洗脱:0.00–0.50min，2％B；0.51–5.00min，40–75％B；5.01–6.00min，2％B；流速0.35-0.45mL·min^－1，柱温35-45℃；质谱仪采用电喷雾离子源，扫描方式为多反应监测，对化合物Isodecaline、6–acetonyldihydrochelerythrine、N-Methylanhydrotetrahydroberberrubine A、escholidine perchlorate、别隐品碱、白鲜碱及内标物盐酸小檗碱在正、负离子模式下进行检测。

2.根据权利要求1所述的竹叶椒药材中生物碱类成分的测定方法，其特征在于，

(1)对照品溶液的制备：分别精密称取Isodecaline对照品、6–acetonyldihydrochelerythrine对照品、N-Methylanhydrotetrahydroberberrubine A对照品、escholidine perchlorate对照品、别隐品碱对照品、白鲜碱对照品和盐酸小檗碱内标化合物，精密加入乙醇或体积浓度50％-100％甲醇，超声溶解，摇匀，制成浓度分别为0.5mg/mL，0.5mg/mL，0.5mg/mL，1mg/mL，1mg/mL，0.5mg/mL和1mg/mL的混合对照品溶液。

3.根据权利要求2所述的竹叶椒药材中生物碱类成分的测定方法，其特征在于，

步骤(2)供试品溶液的制备方法为：

称取0.5mg竹叶椒药材，置于锥形瓶中，加入药材重量25～100倍体积量的提取溶剂，称重，超声提取10～30min，放冷，称重，加入相同提取溶剂，补重，摇匀，离心，取上清，即竹叶椒药材供试品溶液；所述的提取溶剂为甲醇、体积浓度50％甲醇或乙醇。

4.根据权利要求1至3任一项所述的竹叶椒药材中生物碱类成分的测定方法，其特征在于，所述步骤(3)中的色谱柱为柱长50mm的C₁₈反相色谱柱。

5.根据权利要求1至3任一项所述的竹叶椒药材中生物碱类成分的测定方法，其特征在于：所述步骤(3)中的流动相A为0.1‰甲酸水溶液；流动相B为含0.1‰甲酸的乙腈溶液。

6.根据权利要求1至3任一项所述的竹叶椒药材中生物碱类成分的测定方法，其特征在于：所述步骤(3)中Isodecaline、6–acetonyldihydrochelerythrine、N-Methylanhydrotetrahydroberberrubine A、escholidine perchlorate、别隐品碱和白鲜碱的线性方程分别为y＝0.00438x+0.00315、y＝0.083x+0.00241、y＝0.0235x+0.0747、y＝0.00379x+0.00442、y＝0.00443x+0.013和y＝0.018x+0.0659。