[发明专利]一种新型李斯特氏菌选择性分离培养基、制备方法及应用

说明书

本发明涉及生物学检验技术领域，特别涉及一种新型李斯特氏菌选择性分离培养基、制备方法及应用，配方为：每升蒸馏水中添加牛脑浸粉4g、牛心浸粉4g、蛋白胨5g、酪蛋白胨16g、氯化钠5g、丙酮酸钠2g、葡萄糖2g、碳酸氢二钠2.5g、磷酸甘油1g、琼脂粉12.5g、5ml的0.1g/ml磷脂腺肌醇溶液、5ml的0.02g/ml吡喃葡萄糖苷溶液和5ml的0.0125～128.0μg/ml的蜂胶溶液。本发明采用天然抗菌物质蜂胶作为李斯特氏菌选择性分离培养基的选择性添加剂，同时结合改良的基础培养基使用，可以有效抑制各类食品中背景微生物的生长，同时确保所有李斯特氏菌能够在该选择性培养基中生长良好，确保单核细胞增生李斯特氏菌13种血清型菌株均有较好的生长，能够确保在各类食品中准确灵敏的检测出该致病菌。

技术领域

本发明涉及生物学检验技术领域，特别涉及一种新型李斯特氏菌选择性分离培养基、制备方法及应用。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种可引起脑膜炎、败血症、流产等严重侵袭疾病的食源性病原菌，易感孕妇，老人，新生儿和免疫缺陷等人群。2000年该致病菌被世界卫生组织食品安全工作计划列为必检的食源性致病菌，成为危害消费者公共健康的一个巨大隐患。

常规的单核细胞增生李斯特氏菌检测方法主要依靠样品均质后加入选择性增菌液进行选择性增菌培养，随后选择性增菌培养物在选择性分离平板上进行划线分离出单个疑似菌落，再对纯化的疑似菌落进行生理生化检测的流程。然而现有选择性分离平板，无法有效针对各类样品中的致病菌进行有效分离筛选，其主要原因有：1、微生物耐药性的日益增强导致了选择性分离平板中的选择性添加剂无法有效抑制背景微生物的生长，进而导致待检致病菌被背景微生物所遮盖，无法检测；2、各类食品样品，环境样品及临床样品中背景微生物水平差异较大，会导致没有真正意义的通用性选择性分离培养基使用，无法保证其致病菌检测的准确性；3、不同种类的选择性分离培养基无法针对所有单核细胞增生李斯特氏菌13种血清型菌株进行有效的分离，导致检测结果不准确，遗漏样品中某些血清型菌株；4、选择性分离培养基中选择性添加剂多数会对环境造成不良影响，即使经过高压处理后，这种负面影响依旧存在。因此，开发出新型的单核细胞增生李斯特氏菌选择性分离培养基显得尤为重要。

发明内容

本发明提供一种新型李斯特氏菌选择性分离培养基、制备方法及应用，采用天然抗菌物质蜂胶作为李斯特氏菌选择性分离培养基的选择性添加剂，能够确保在各类食品中准确灵敏的检测出该致病菌。

本发明解决技术问题的方案是：一种新型李斯特氏菌选择性分离培养基，所述选择性分离培养基的配方为：每升蒸馏水中添加牛脑浸粉4g、牛心浸粉4g、蛋白胨5g、酪蛋白胨16g、氯化钠5g、丙酮酸钠2g、葡萄糖2g、碳酸氢二钠2.5g、磷酸甘油1g、琼脂粉12.5g、5ml的0.1g/ml磷脂腺肌醇溶液、5ml的0.02g/ml吡喃葡萄糖苷溶液和5ml的0.0125～128.0μg/ml的蜂胶溶液。

优选的，所述蜂胶溶液浓度为0.0125μg/ml的1倍或者偶数倍。

一种新型李斯特氏菌选择性分离培养基的制备方法，包括以下步骤：

S1：按重量称取以下组分：每升蒸馏水中添加牛脑浸粉4g、牛心浸粉4g、蛋白胨5g、酪蛋白胨16g、氯化钠5g、丙酮酸钠2g、葡萄糖2g、碳酸氢二钠2.5g、磷酸甘油1g、琼脂粉12.5g，加热混匀溶解，灭菌，50℃水浴保温备用，得基础培养基；

S2：配制0.0125～128.0μg/ml的蜂胶溶液，混匀，灭菌，50℃水浴备用；

S3：配制0.1g/ml磷脂腺肌醇溶液，混匀，孔径φ0.22μm的膜过滤除菌，50℃水浴保温备用；

S4：配制0.02g/ml吡喃葡萄糖苷溶液，混匀，孔径φ0.22μm的膜过滤除菌，50℃水浴保温备用；