[发明专利]一种实验室中筛选烟草抗黑胫病种质的方法

说明书

本发明公开了一种实验室中筛选烟草抗黑胫病种质的方法，其中，按照下列步骤操作：a、培育不同种质的烟苗；b、分别收集不同种质的根系分泌物；c、将根系分泌物灭菌后与燕麦培养基混合，并倒入培养皿中；d、接种黑胫病菌菌饼；e、十字交叉法测量菌落直径；f、根据菌落直径大小鉴定抗性水平，从而鉴定获得抗病种质。本发明将烟草根系分泌物加入到培养基中，可以在实验室中完成烟草种质对黑胫病的抗性鉴定，比常规田间病圃鉴定省去了大面积带菌试验地（田间病圃）的设置，又不需要一个生长季节的烟草种植，节省了人力、物力与时间。该发明使烟草种质对黑胫病的抗性鉴定不受生长季节的限制，并且在短时间内可以完成大量烟草种质的筛选。

技术领域：

本发明涉及农业生物技术领域，特别涉及一种实验室中筛选烟草抗黑胫病种质的方法。

背景技术：

烟草黑胫病是烟草的重要病害之一。烟草黑胫病又称烟草疫病，俗称 “黑杆疯”、“腰烂”、“猪屎斑”，“黑膏药”等，是由Phytophthora parasitica var nicotianae 引起的，该病可造成烟株快速死亡，全世界各主要产烟区均有不同程度的发生，发病率一般为5％～15％，重病区发病率可达30％以上，能给烟草生产造成毁灭性的打击，是世界性的烟草重要病害。近年来，随着烟草连作种植年限的延长，全国各烟区病情日趋严重。由于生产上栽培烟草品种对黑胫病抗性较差或综合抗性不足，黑胫病的防治目前仍然依赖于化学防治。防治烟草黑胫病的主要农药为甲霜灵锰锌和霜霉威，药剂种类较为单一，且均已有十几年甚至几十年的使用历史，病菌对化学农药产生抗药性，导致防治效果下降，防治成本增加，环境污染加剧。因此减少农药使用，促进安全优质烟叶生产，对改善农业生态环境具有重要意义。抗病品种的应用是植物病害防治最安全有效与经济的方法。

为了不断提高烟草品种的抗病性，需要不断的筛选新的可利用的抗源。烟草黑胫病抗病种质筛选的传统方法是首先建立病圃（即几亩至几十亩农田，农田中含有大量的黑胫病菌），人工培育烟苗，将烟苗种植在病圃中，待烟株生长至成熟期，根据发病情况进行鉴定，通常还需人工接种。这种常规方法如现有技术CN101671720A公开了一种病圃中烟草黑胫病的生理小种的鉴定方法：一、测定鉴别寄主在田间的抗病反应：在病圃中栽培鉴别寄主，在烤烟烟叶采收后挖根调查，对鉴定品种进行分级和抗性评价，集合烟草黑胫病0. 1.2和3号小种的寄主反应判断生理小种类型；二、测定菌株在TTC固体培养基中的颜色变化：从病圃中随机采集不同品种的病株，分离纯化病原并鉴定后，进行TTC法测定，根据颜色变化判断烟草黑胫病生理小种类型；三，综合上述两种鉴定结果，鉴别寄主在田间的抗病反应和TTC测定结果判断生理小种类型。这种传统的鉴定方法不仅耗时长，而且需要建立病圃，并且鉴定结果受天气条件的影响很大。

再如现有技术中，CN106665328A公开了一种烤烟抗黑胫病定向培育方法，选育流程：种质资源的筛选-亲本选配-F1病圃鉴定-F2-3代病圃筛选-F4-6大田鉴定-品系鉴定-品系比较实验-区域实验-生产实验-品种审定。这种筛选方法仍然通过建立病圃的方式，虽然缩短品种后期病害的鉴定时间，但整体时间仍然过长。