[发明专利]一种工程菌及其应用

权利要求书

1.一种四酶共表达的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于该菌采用 双质粒共表达四种酶，分别为L-氨基酸氧化酶、α-酮酸脱羧酶、醇脱氢酶和可将NAD(P)还原 成NAD(P)H的酶；该工程菌可应用于转化芳香L-α-氨基酸，生成对应的苯乙醇类化合物；所述L-氨基酸氧化酶的核苷酸序列如序列表中的：SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；所述α-酮酸脱羧酶的核苷酸序列如序列表中的：SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4；所述醇脱氢酶的核苷酸序列如序列表中的：SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6；所述可还原NAD(P)的酶为甲酸脱氢酶、葡萄糖脱氢酶和亚磷酸脱氢酶，其对应的核苷酸序列分别如序列表中的：SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ IDNO:9。

2.如权利要求1所述工程菌株应用于生产过程时，底物为L-苯丙氨酸时，产物为苯乙醇。

3.如权利要求1所述工程菌株应用于生产过程时，底物为L-酪氨酸时，产物为酪醇。

4.如权利要求1所述工程菌株应用于生产过程时，底物为L-多巴时，产物为羟基酪醇。

5.如权利要求1所述工程菌株应用于α-羟基羧酸的生产过程特征在：重组大肠杆菌按体积比为2％的量转接到LB发酵培养基中，当细胞OD600达到0.6～0.8后，加入终浓度为0.4mM的IPTG，在20℃诱导表达培养8h； 诱导表达结束后，20℃、8000rpm、20分钟离心收集细胞； 将收集的细胞加水重悬细胞湿重为10-200g/L，然后添加L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-多巴中的任意一个，浓度为0.5-20g/L，并根据构建的不同质粒的性质加入供氢体浓度为1-20g/L，调节pH 4.0-8.0； 于15-40℃反应，时间0.5-48小时。

6.如权利要求5所述的供氢体特征在于：当构建的四酶共表达菌株中含有葡萄糖脱氢酶时，供氢体为葡萄糖； 当构建的四酶共表达菌株中含有甲酸脱氢酶时，供氢体为甲酸钠；当构建的四酶共表达菌株中含有亚磷酸脱氢酶时，供氢体为亚磷酸。