[发明专利]一种工程菌及其应用

权利要求书

1.一种三酶共表达的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，该菌采用pQLinkN质粒共表达三种酶，分别为D-α-羟基羧酸脱氢酶或L-α-羟基羧酸脱氢酶，和L-氨基酸氧化酶，和可还原NAD(P)的酶；该工程菌可应用于转化L-α-氨基酸，生成对应的α-羟基羧酸；所述L-氨基酸氧化酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述D-α-羟基羧酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ IDNO.1或SEQ ID NO.3所示；所述L-α-羟基羧酸脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述可还原NAD(P)的酶核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示。

2.一种生产二羟基苯基乳酸的方法，其特征在于，所述二羟基苯基乳酸为(R)-3,4-二羟基苯基乳酸或(S)-3,4-二羟基苯基乳酸，以权利要求1所述基因工程菌为生产菌株，以L-多巴为底物。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，当在权利要求1所述基因工程菌中表达核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示的D型α-羟基羧酸脱氢酶基因时，以L-多巴为底物生成(R)-3,4-二羟基苯基乳酸。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，当在权利要求1所述基因工程菌中表达核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的L型α-羟基羧酸脱氢酶时，以L-多巴为底物生成(S)-3,4-二羟基苯基乳酸。

5.如权利要求2~4任一所述的方法，其特征在于，将基因工程菌按体积比为2％的量转接到LB发酵培养基中，当细胞OD600达到0.6～0.8后，加入终浓度为0.4mM的IPTG，在20℃诱导表达培养8h；诱导表达结束后，20℃、8000rpm、20分钟离心收集细胞；将收集的细胞加水重悬细胞湿重为1-10g/L，然后添加L-多巴为底物，浓度为0.1-10g/L，并根据构建的不同质粒的性质加入供氢体浓度为1-10g/L，调节pH4.0-8.0，于15-40℃反应，时间0.5-24小时；所述供氢体为葡萄糖。