[发明专利]一种巴氏杆菌培养基及其制备鉴别方法

说明书

本发明提供了一种巴氏杆菌培养基，该巴氏杆菌培养基括动物肉粉、NaCl、血液、甘露醇以及水，还包括抑菌剂、指示剂以及显色剂。使用本发明提供的巴氏杆菌培养基，可以保证巴氏杆菌的良好生长，添加抑菌剂抑制了杂菌生长，添加指示剂与显色剂可以有效的鉴别巴氏杆菌，降低检测成本、提高检测速度。本发明还提供巴氏杆菌培养基的制备方法。

技术领域

本发明涉及兽医微生物领域，尤其涉及一种巴氏杆菌培养基及其制备方法，以及利用此巴氏杆培养基进行巴氏杆菌的鉴别方法。

背景技术

巴氏杆菌为獭兔发病的主要病原菌之一，巴氏杆菌病是引起9周龄至6月龄的兔死亡的最主要原因。巴氏杆菌病潜伏期长短不一，一般从几小时到5天或更长。在獭兔养殖中，很难通过临床症状对巴氏杆菌病原菌导致的疾病进行准确的诊断，导致用药不对症，造成獭兔的大量死亡。只有进行细菌学检查，找出病原菌才能最后确诊是否是巴氏杆菌病原菌导致的疾病，因此病原菌的快速分离与鉴别成为了解决上述问题的最优方法。

目前并没有一种针对巴氏杆菌分离及鉴定的标准方法，无法快速便捷的对巴氏杆菌进行分离与鉴别。被相关技术人员广泛接受的方法有两种，一是使用含血清血红素的普通肉汤培养基划线纯化，利用胆硫乳琼脂(DHL)培养基和相关的生化管或PCR技术进行鉴别；二是使用加血的马丁肉汤培养基划线纯化，利用DHL培养基和相关的生化管或PCR技术进行鉴别，但是这两种方法存在以下弊端：

一方面，上述两种方法中使用的培养基，并不是针对巴氏杆菌分离及鉴定使用的，其选择性较弱。

另一方面，针对培养基中的细菌分子进行的生化管或PCR等常规检测鉴别技术步骤繁琐，耗时较长，成本过高。例如，目前常用的PCR鉴别技术是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，能将微量的DNA大幅增加。在细菌基因组中，编码16S rRNA的rDNA基因具有良好的进化保守性，适宜分析的长度(约为1540bp)，以及与进化距离相匹配的良好变异性，所以成为细菌分子鉴定的标准标识序列。但是这种基于DNA片段分子进行的PCR鉴别技术价格昂贵，操作过程复杂，大大降低检测速度。

因此，为了快速有效的分离鉴别巴氏杆菌，提供一种能够针对巴氏杆菌进行快速分离及鉴定、且成本较低的培养基具有重要意义。

发明内容技术领域

本发明旨在解决上面描述的问题。本发明的目的是提供一种巴氏杆菌培养基及其制备方法，以及利用此培养基进行巴氏杆菌的鉴别方法。该巴氏杆菌培养基中加入动物肉粉为巴氏杆菌的生长提供营养物质，加入抑菌剂抑制杂菌生长，通过指示剂与显色剂的联合使用更加快速准确的鉴别巴氏杆菌。本发明中的巴氏杆菌培养基保证了巴氏杆菌的良好生长，抑制了杂菌的生长，并且可以有效的鉴别巴氏杆菌，降低检测成本、提高检测速度。

本发明提供一种巴氏杆菌培养基，所述巴氏杆菌培养基包括动物肉粉、NaCl、血液、甘露醇以及水；其中，各组分的含量为：

其中，所述巴氏杆菌培养基还包括抑菌剂，所述抑菌剂含量为0.005～0.015g。

其中，所述巴氏杆菌培养基还包括指示剂与显色剂，所述指示剂含量为0.3～0.7g，所述显色剂含量为2～5mL。

其中，所述巴氏杆菌培养基包括动物肉粉、NaCl、血液、甘露醇、水、抑菌剂、指示剂以及显色剂；其中，各组分的含量为：

其中，所述抑菌剂包括万古霉素，所述指示剂包括硫代硫酸钠与硫酸亚铁，所述显色剂包括中性红；所述动物肉粉为兔肉粉，所述血液为兔鲜血。

其中，所述硫代硫酸钠与所述硫酸亚铁的比为3:2。

其中，所述巴氏杆菌培养基还包括琼脂，所述琼脂15～25g。