[发明专利]miRNA分子及其抑制剂在调控骨间充质干细胞成脂分化中的应用

说明书

本发明公开了一种miRNA分子及其抑制剂在调控骨间充质干细胞成脂分化中的应用，所述miRNA为miR‑3963，其序列为5’‑UGAGAACUGAAUUCCAUAGGCU‑3’，所述调控为促进或抑制。本发明利用miR‑3963或其抑制剂对小鼠骨实质来源MSC成脂分化能力的调控作用，过表达miR‑3963后，MSC成脂分化能力显著升高；敲减miR‑3963后，MSC成脂分化能力显著下降，由此提出了调控间充质干细胞成脂分化的新型小分子化合物，可应用于调节脂肪合成、控制间充质干细胞成脂分化。

技术领域

本发明属于间充质干细胞培养技术领域，具体涉及一种miRNA分子及其抑制剂在调控骨间充质干细胞成脂分化中的应用。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于动物组织和器官，例如骨髓、脂肪组织、心脏、肺脏及新生儿组织包括胎盘、羊膜和脐带，在适宜条件下能够分化为成骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞等多种类型细胞。MSC还可以通过分泌细胞外基质和可溶性因子，如细胞因子、趋化因子、生长因子等多种代谢产物，间接调控肿瘤发生与发展。

微小RNA(microRNA，miRNA)是生物体内一类具有调控基因表达作用的非编码小RNA分子，其发夹状前体经Dicer酶切成为21-24nt的成熟的miRNA，通过与靶基因mRNA碱基互补配对的方式，下调基因表达或促进下游mRNA降解。在生物体发育、细胞程序性凋亡坏死、细胞增殖、免疫和神经系统模式形成等生命过程中，miRNA的表达与调控发挥着至关重要的作用，其表达异常可以导致多种疾病发生。因此，深入研究miRNA的功能将有助于我们理解生物发育与疾病的作用机制。同理，也有大量的miRNA参与MSC的增殖、分化、迁移以及免疫调控等生物学功能。

发明内容

本发明人通过研究，发现miR-3963对小鼠骨实质来源MSC成脂分化能力的具有调控作用。

本发明目的之一在于提供miRNA和/或其抑制剂在调控骨间充质干细胞成脂分化中的应用，所述miRNA为miR-3963，其序列为5’-UGAGAACUGAAUUCCAUAGGCU-3’，所述调控为促进或抑制。

上述应用中，所述miRNA抑制剂为单链RNA分子，其序列为5’-GUGUGCAGAAGUGGGAUACA-3’。

上述应用中，所述骨间充质干细胞为小鼠骨实质来源间充质干细胞。

本发明同时也提供了一种促进小鼠骨间充质干细胞成脂分化的方法，包括以下步骤：

分离提取获得小鼠骨片，消化后进行原代培养、传代培养，获得小鼠骨实质间充质干细胞；

将miR-3963导入传代培养后的小鼠骨实质间充质干细胞，然后培养。

上述方法中，所述消化的方法为：将骨片用浓度为0.1％的II型胶原酶，在37℃下，消化30-50min。

上述方法中，所述原代培养的方法为：在温度为37℃、CO₂浓度为5％、湿度为饱和湿度的条件下，采用含10％FBS的α-MEM完全培养基，培养72h后全量换液；培养过程中每2-3d更换一次新的含10％FBS的α-MEM完全培养基。

上述方法中，所述传代培养的方法为：待爬出的细胞在培养瓶底部融合成单层，达80％-90％融合度时，加入胰酶消化，离心，收集的细胞重新接种于含10％FBS的α-MEM完全培养基，传代比例为1:2-1:3；所述胰酶的浓度为0.25％；所述离心的转速为1000rpm，时间为10min。

上述方法中，所述α-MEM完全培养基中青霉素、链霉素的量分别为100U/ml。