[发明专利]miRNA分子及其抑制剂在调控骨间充质干细胞成脂分化中的应用有效
| 申请号： | 201710606234.4 | 申请日： | 2017-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN107189985B | 公开（公告）日： | 2021-02-02 |
| 发明（设计）人： | 张毅;刘伟江;李雪;刘元林;樊月;滕天怡;张伟;王鹏;白博乾;童越 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 陈波 |
| 地址： | 100850 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | mirna 分子 及其 抑制剂 调控 骨间充质 干细胞 分化 中的 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种促进小鼠骨间充质干细胞成脂分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
分离提取获得小鼠骨片，消化后进行原代培养、传代培养，获得小鼠骨实质间充质干细胞；
将miR-3963导入传代培养后的小鼠骨实质间充质干细胞，然后培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消化的方法为：将骨片用浓度为0.1％的II型胶原酶，在37℃下，消化30-50min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述原代培养的方法为：在温度为37℃、CO2浓度为5％、湿度为饱和湿度的条件下，采用含10％FBS的α-MEM完全培养基，培养72h后全量换液；培养过程中每2-3d更换一次新的含10％FBS的α-MEM完全培养基。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述传代培养的方法为：待爬出的细胞在培养瓶底部融合成单层，达80％-90％融合度时，加入胰酶消化，离心，收集的细胞重新接种于含10％FBS的α-MEM完全培养基，传代比例为1:2-1:3；所述胰酶的浓度为0.25％；所述离心的转速为1000rpm，时间为10min。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述α-MEM完全培养基中青霉素、链霉素的量分别为100U/ml。
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