[发明专利]一种PCR无效扩增的检测方法

权利要求书

1.一种PCR无效扩增的检测方法，其特征在于，该方法根据PCR反应荧光强度检测结果，通过第一阈值和第二阈值检测出假阳性、假阴性及波动超限产生的无效扩增。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一阈值R1为至少包含3个循环周期的荧光信号标准偏差的3～15倍，起始周期为第2～10个循环周期，结束周期为第10～25个循环周期；或为第C_n个周期的荧光强度值，第C_n个周期的荧光强度值满足：

R(Cn+1)-R(Cn)R(Cn)-R(Cn-1)>1.1]]>

其中C_n代表扩增周期，R是对应扩增周期的荧光强度值。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一阈值R1为至少包含3个循环周期的荧光信号标准偏差的10倍。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二阈值R2为终点荧光检测的阴阳分割值。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，无效扩增的检测方法如下：

若终点阈值R>R2时，判定为待定阳性；将阈值线y＝R1与阈值线y＝R2之间增长区的最大斜率Ki与扩增效率K(K为PCR扩增实测值)值进行比较，当Ki>＝K时，判定为阳性，否则为假阳性；

若终点阈值R<R1时，判定为阴性；

若终点阈值R1＝<R<＝R2时，判定为待定阴性。将阈值线y＝R1与阈值线y＝R2之间增长区的最大斜率Ki与扩增效率K值进行比较，当Ki<＝K时，判定为阴性，否则为假阴性；

假阴性和假阳性均为无效扩增。

若扩增曲线在扩增结束前L个周期之间的荧光值波动大于这L个周期的荧光值均方差的2～5倍，L取3‐15，则判定为波动无效扩增。

若扩增曲线在扩增的3‐15个循环周期之间，其中，起始周期为第2～10个循环周期，结束周期为第10～25个循环周期，荧光值恒定且高于第一阈值线R1，则判定该扩增为无效扩增。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，L为5个，扩增曲线在扩增结束前5个周期之间的荧光值波动大于这5个周期的荧光值均方差的3倍，则为无效扩增。