[发明专利]一种重组毕赤酵母工程菌、全细胞催化剂及莱鲍迪苷A的合成方法

权利要求书

1.一种重组毕赤酵母工程菌，其特征在于，所述重组毕赤酵母工程菌是通过将含有如下外源DNA序列的表达载体转化到毕赤酵母而获得：

所述外源DNA为编码蔗糖合成酶Sus1的DNA序列，所述蔗糖合成酶Sus1的氨基酸序列如Seq No.1所示。

2.如权利要求1所述的重组毕赤酵母工程菌，其特征在于：所述外源DNA序列如Seq No.2所示。

3.如权利要求2所述的重组毕赤酵母工程菌，其特征在于：所述表达载体为将所述外源DNA克隆至巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZA，得到的胞内表达载体pPICZA-Sus1。

4.如权利要求3所述的重组毕赤酵母工程菌，其特征在于：所述重组毕赤酵母工程菌是所述胞内表达载体pPICZA-Sus1线性化后转化到巴斯德毕赤酵母而得。

5.一种全细胞催化剂，其特征在于：包括如权利要求1-4中任意一项所述的重组毕赤酵母工程菌。

6.如权利要求5所述的全细胞催化剂，其特征在于，所述全细胞催化剂是通过如下步骤制备而成：

挑取重组毕赤酵母工程菌接种到BMGY培养基，30℃，250rpm培养至OD600接近6.0，于6000rpm,4℃离心5min收集细胞，然后将收集的细胞重悬到BMMY培养基至起始OD600接近1.0，于30℃，250rpm震荡培养，每天补加终浓度1％甲醇；发酵3天后在6000rpm，4℃离心5min回收菌体；冻干后即为重组毕赤酵母全细胞催化剂。

7.一种莱鲍迪苷A的合成方法，其特征在于：该方法以蔗糖、二磷酸尿苷、甜菊苷为原料，以权利要求5或6中所述的全细胞催化剂为催化剂合成莱鲍迪苷A。

8.如权利要求7所述的莱鲍迪苷A的合成方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)按如下组分及其浓度制备反应体系；

50mM PBS缓冲液，

3mM MgCl₂，

50mM蔗糖，

1mM UDP，

10mg/mL甜菊苷；

(2)加入菌体量为30OD重组毕赤酵母与30OD菌体量的全细胞催化剂，于37℃进行反应，反应12h后停止反应；

(3)将反应液稀释5倍后，用0.2um水系尼龙膜过滤后用液相色谱检测RA的合成。