[发明专利]一种利用PCR产物抑制昆虫基因表达的方法

权利要求书

1.一种利用PCR产物抑制昆虫基因表达的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：

1）确定昆虫靶标基因，PCR扩增获得该基因的全基因序列并测序；

2）根据步骤1）得到的全基因序列，在外显子和内含子上分别确定PCR扩增区域，并PCR扩增和纯化得到实验所需的外显子DNA片段与内含子DNA片段；所述外显子DNA片段序列如SEQ ID NO. 2所示，内含子DNA片段序列如SEQ ID NO. 3所示；

3）将步骤2）得到的外显子DNA片段和内含子DNA片段，利用微量注射的方法分别注射入昆虫体内；

4）对步骤3）的昆虫进行RT-qPCR的检测，确定其靶标基因的相对表达水平；

步骤1）所述的靶标基因为小菜蛾鞣化激素α亚基基因，该基因序列如SEQ ID NO. 1所示；

步骤3）中的昆虫为福州敏感品系小菜蛾四龄幼虫。

2.根据权利要求1所述的一种利用PCR产物抑制昆虫基因表达的方法，其特征在于，步骤3）中用到的注射针是利用拉针仪，采用一步法所制得的毛细玻璃注射针。

3.根据权利要求1所述的一种利用PCR产物抑制昆虫基因表达的方法，其特征在于，步骤3）中注射的DNA片段浓度为100 - 400 ng/μL。

4.根据权利要求1所述的一种利用PCR产物抑制昆虫基因表达的方法，其特征在于，步骤4）中RT-qPCR检测的内参基因是核糖体蛋白L8基因。

5.根据权利要求1所述的一种利用PCR产物抑制昆虫基因表达的方法，其特征在于，步骤4）中基因的相对表达水平的计算采用2^-ΔΔCT。