[发明专利]一种作为分子标记的与猪胴体性状相关的14-3-3ζ基因片段的克隆与应用

说明书

本发明属于动物分子标记制备技术领域，具体涉及一种作为分子标记的与猪胴体性状相关的14‑3‑3ζ基因片段的克隆与应用。14‑3‑3ζ基因片段的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示，其长度为2050bp，在第938bp处为T938C的碱基突变，导致BstxIPCR‑RFLP多态性。本发明还公开了检测碱基突变的引物对以及14‑3‑3ζ基因片段的克隆方法及应用，为猪的分子标记辅助选择提供了一个新的分子标记。

技术领域

本发明属于动物分子标记制备技术领域，具体涉及一种作为分子标记的与猪胴体性状相关的14-3-3ζ基因片段的克隆与应用。

背景技术

猪肉是肉类消费的重要组成部分，是人类获得蛋白质营养物质的主要途径之一，在国人饮食结构中占据绝对的比重。长期以来，以提高生长速度、减少饲料消耗、增加瘦肉率为主要目标传统猪育种方法取得了显著成绩。但在猪的瘦肉率和生长速度大幅度提高的同时，传统的育种手段也遭遇到发展的瓶颈，已经很难像过去那样大幅度地提高猪的生产水平了。而猪生产水平的提高实际上降低了猪的体质和适应性，并影响到猪的肌肉品质。随着我国社会经济的发展，人民生活水平与消费水平的提高，人们在膳食结构与饮食观念也发生了变化，对猪肉品质的要求也越来越高。这一系列的矛盾和问题，迫切需要用新的手段和对策解决如何培育出安全环保优质新品种猪的问题。

快速发展的遗传学和分子生物学技术为突破传统育种的瓶颈提供强有力的补充，将猪育种工作推向新的分子育种阶段。目前，标记辅助选择(MAS)、重要数量性状的基因组区域定位、候选基因法和全基因组关联分析等研究已经成功地应用到国内外的猪育种实践当中，取得了巨大的经济效益和社会效益。已有多个位于功能基因内部的与生产性状紧密连锁的分子标记被发现。例如，与生长性状显著相关的MC4R、IGF-1、GRF，与产仔数和排卵率显著相关的候选基因ESR、FSH、PRLR、RBP4，与胴体性状显著相关的MSTN、HSL，与肉质性状显著相关的PRKAG3、Hal、OB、RYR1、H-FABP，与抗病能力显著相关的FUT1、SLA、NRAMP、大肠杆菌k88受体基因，以及与被毛颜色显著相关的KIT、MC1R。这些基因标记信息与传统的表型信息一起，通过标记辅助选择的方法，被积极的应用在生猪的商业生产中，给生猪产品的提高与促进带来了很大的帮助。

14-3-3蛋白又称酪氨酸3-加单氧酶/色氨酸5-加单氧酶激活蛋白(tyrosine 3-monooxygenase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein)，是一个高度保守的、在真核生物中广泛表达的、具有复杂功能的调节性蛋白家族，主要通过与Ser/Thr磷酸化蛋白绑定结合发挥作用，参与许多重要的细胞生理过程，如信号转导、酶和细胞因子活性调节、细胞骨架动力学调节、细胞周期调控、细胞增生、分化和凋亡调节等。哺乳动物14-3-3蛋白至少存在7个由不同基因编码的高度保守的亚型，分别为β、γ、ε、ε、σ、ζ和τ，而β和σ分别是b和x的磷酸化形式，各亚型都有特殊的功能。通常14-3-3蛋白主要以同源或异源二聚体存在，14-3-3蛋白的N-末端约26-个氨基酸残基组成的结构域可能在14-3-3蛋白的二聚化中发挥了重要作用。

14-3-3ζ是14-3-3蛋白家族的重要一员，在肌形成及骨骼肌的生长发育中也起着非常重要的作用。MEF2(myocyte enhancer factor-2)是肌肉中一个重要的转录因子，其介导的多个信号通路在肌肉发育过程中起着关键的调节作用，它主要通过激活肌肉中一些特异表达的基因来发挥功能，但其活性又受到II型HDACs(histone deacetylases)和MITR(MEF2-interacting transcription repressor)的调控，HDACs和MITR能够在细胞核中与MEF2结合从而抑制MEF2的活性，而14-3-3ζ蛋白在细胞核中能够结合II型HDACs和MITR，使HDACs和MITR与MEF2解离而游离出细胞核，从而间接地激活MEF2。