[发明专利]苯扎氯铵溶液微生物限度检查方法

说明书

技术领域

本发明涉及酶或微生物的测定或检验方法，具体是一种苯扎氯铵溶液微生物限度检查方法。

背景技术

苯扎氯铵溶液为氯化二甲基苄基氢胺的混合物，无色或淡黄色的澄清液体，气芳香，味极苦，振摇时能产生大量泡沫，用于手术前皮肤消毒，粘膜和伤口消毒。

苯扎氯铵为阳离子表面活性剂，广谱杀菌剂，对革兰氏阳性细菌作用较强，在制药工程中作为防腐剂使用。由于苯扎氯铵原料抑菌作用大，在设计微生物限度检查方法上存在极大的困难。

发明内容

本发明就是为了解决苯扎氯铵原料抑菌作用大，微生物限度检查困难的问题，所提出的一种苯扎氯铵溶液微生物限度检查方法。

本发明是按照以下技术方案实现的。

一种苯扎氯铵溶液微生物限度检查方法，包括以下步骤：

Ⅰ. 取苯扎氯铵溶液，加入稀释液，制成1:10供试液；

Ⅱ. 用无菌吸头吸取1份供试液，加入到50份稀释液中，混匀；

Ⅲ. 先用少量冲洗液润洗低吸附性滤膜，再采用薄膜过滤法将稀释后供试液全量过滤，用冲洗液分次冲洗滤膜，每次的冲洗量为总冲洗量的1/16；

Ⅳ. 同法制备两张滤膜，分别贴于两种不同的培养基上，适宜条件培养后，点计菌落数；

Ⅴ. 阴性对照：采用薄膜过滤法将稀释液进行过滤，菌面朝上贴于培养基上培养。

所述稀释液和冲洗液的成分为蛋白胨干粉和吐温-80，二者的质量份数比为1:1。

所述稀释液和冲洗液的制备方法为：称蛋白胨干粉5份、吐温-80 5份，溶于1000份水中，调pH使灭菌后的pH值为7.1±0.2，115-121℃高压灭菌15-30分钟。

所述总冲洗量为800ml。

所述培养基为胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基；胰酪大豆胨琼脂培养基于30-35℃培养3天，沙氏葡萄糖琼脂培养基于20-25℃培养5天。

所述阴性对照稀释液过滤后，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基上，30-35℃培养3天。

本发明获得了如下的有益效果。

本发明有效的解决了苯扎氯铵原料抑菌作用大，微生物限度检查困难的问题。本发明通过前期大量计数方法适用性初筛试验，确定了稀释液、冲洗液以及稀释液、冲洗液的量，且试验结果以“cfu/ml”计算，提高了检测结果的准确性。本发明的试验方法科学，试验结果准确，填补了苯扎氯铵原料微生物限度检查方法的空白，具有广阔的应用前景。

具体实施方式

一、试验准备：

1．供试品：苯扎氯铵溶液（10%）

2. 菌种：

金黄色葡萄球菌（CMCC（B）26003）

铜绿假单胞菌（CMCC（B）10104）

枯草芽孢杆菌（CMCC（B）63501）

白色念珠菌（CMCC（F）98001）

黑曲霉菌（CMCC（F）98003）

以上标准菌株均购自中国药品生物制品检定所或天津市药品检验所。

3．培养基（详见表1）

4．培养基、冲洗液、中和剂配制方法（详见表2）

5．试验仪器（详见表3）

6. 菌悬液的制备：

a.增菌：分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上，30-35℃恒温箱培养18-24小时；接种白色念珠菌、黑曲霉菌于沙氏葡萄糖琼脂培养基中，20-25℃恒温箱培养，白色念珠菌培养24-48小时，黑曲霉菌5-7天，用3-5ml含0.05%吐温80的0.9%无菌NaCl溶液将黑曲霉孢子洗脱，用管口带有无菌脱脂棉的毛细管收集孢子悬液于无菌试管中保存，备用。

b.菌液稀释：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的新鲜培养物用0.9%无菌NaCl溶液按10倍稀释，制成试验菌液；试验菌液每毫升含菌量小于100cfu。

c.新制备的菌悬液在室温条件下应在2小时内使用，2-8℃冷藏可保存24小时。

二、试验方法的建立

《中国药典》规定：供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。