[发明专利]微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法

说明书

本发明涉及一种利用微生物转化制备11α‑OH‑18‑methyl‑nandrolone的方法，其特征在于，以18‑methyl‑nandrolone为原料，经过绿僵菌(Metarhizium anisopliae)静息细胞转化，提取得到11α‑OH–18–methyl‑nandrolone。通过该方法制备得到11α‑OH‑18‑methyl‑nandrolone，提纯后的精品相对底物重量收率为70％～80％，11α‑OH‑18‑methyl‑nandrolone精品为白色晶体，经过HPLC分析，归一含量97％，外标含量95％。

技术领域

本发明涉及微生物学技术领域，特别是涉及一种利用微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法。

背景技术

地索高诺酮作为新一代强效孕激素，对孕激素受体有较强亲和力和可靠的抑制排卵作用，而对雄激素受体亲和力低，只有轻微的雄激素和蛋白质同化代谢活性，且对脂代谢无不良影响，被国内外普遍认为是一种优于现代广泛使用的炔诺酮和18甲基炔诺酮的新型避孕药物。11α-OH-18-methyl-nandrolone是合成地索高诺酮关键中间体，目前，工业上主要采用化学方法合成11α-OH-18-methyl-nandrolone，其步骤繁锁，成本较高。

从1952年首次将微生物应用到甾体转化中开始，微生物用于甾体的生产受到广泛关注，被认为是引入功能基团到甾体分子上的一种重要工具。相较甾体的化学合成方法，采用微生物转化方法反应条件温和，产物比较单一，具有很高的立体选择性和化学选择性，对于工业生产来说不仅经济而且效率高。

然而，微生物转化虽然克服了化学合成法中的大部分问题，但仍然存在一些弊端：如底物专一性不高，体积/时间效力较低；生产力达不到要求，产物提取困难，纯化比较繁琐(主要由于转化不完全，产物以底物-目的产物的混合结晶析出或含有副产物)，产物纯度等级不够等。到目前为止，虽然发现了一些有潜在应用价值的霉菌，但大多数菌对转化条件及操作要求较高，且副产物种类较多，真正能用于工业生产的不多。目前还没有适合工业生产11α-OH-18-methyl-nandrolone的微生物转化方法。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种适合工业生产，微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法。

一种微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法，其特征在于，包括如下步骤：

以18-methyl-nandrolone为原料，经过绿僵菌(Metarhizium anisopliae)静息细胞转化得转化液；

将所述转化液分离提取得到11α-OH–18–methyl-nandrolone。

微生物转化过程表示如下：

在其中一个实施例中，所述绿僵菌静息细胞转化过程所使用的转化体系为磷酸缓冲体系，所述磷酸缓冲体系为每升磷酸缓冲液中含有2.0g～10.0g的18-methyl-nandrolone、40.0g～100.0g绿僵菌菌丝体、0.1g～0.5g吐温80和0.1g～0.5g消泡剂；磷酸缓冲体系的pH＝3.8～5.5。

进一步的，所述18-methyl-nandrolone是经过微粒化处理的，颗粒大小为100～200目。将底物磨成细粉状可以促进底物的溶解，增加与菌体的接触面积，提高转化效率。

在其中一个实施例中，所述绿僵菌静息细胞转化的参数为：温度25℃～32℃，搅拌转速100rpm/min～200rpm/min，空气流量0.3vvm～0.7vvm，罐压0.02MPa～0.06MPa。

在其中一个实施例中，所述绿僵菌菌丝体由如下方法制备而得：将绿僵菌菌种接种到液体培养基中，培养结束后，将培养液与菌丝体过滤分离得到绿僵菌菌丝体。