[发明专利]微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法

权利要求书

1.一种微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法，其特征在于，包括如下步骤：

以18-methyl-nandrolone为原料，经过绿僵菌静息细胞转化得转化液；

将所述转化液分离提取得到11α-OH–18–methyl–nandrolone；

其中，所述绿僵菌静息细胞转化过程所使用的转化体系为磷酸缓冲体系，所述磷酸缓冲体系的pH 值为3.8 ~ 5.5，所述磷酸缓冲体系中的每升磷酸缓冲液中含有2.0 g ~ 10.0g的18-methyl-nandrolone、40.0 g ~ 100.0 g绿僵菌菌丝体、0.1 g ~ 0.5 g吐温80和0.1g ~ 0.5g消泡剂；

所述绿僵菌静息细胞转化的参数为：温度25 ℃ ~ 32 ℃，搅拌转速100 rpm ~ 200rpm，空气流量0.3 vvm ~ 0.7 vvm，罐压0.02 MPa ~ 0.06 MPa；

所述绿僵菌菌丝体由如下方法制备而得：将绿僵菌菌种接种到液体培养基中，培养结束后，将培养液与菌丝体过滤分离得绿僵菌菌丝体；所述液体培养基中包含10 g/L ~ 20g/L的玉米浆和10 g/L ~ 40 g/L的葡萄糖，培养基的pH = 3.8 ~ 5.5；所述绿僵菌菌种的培养条件为：温度26 ℃ ~ 30 ℃，转速120 rpm ~ 180rpm；培养时间30 ~ 48小时。

2.根据权利要求1所述的微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法，其特征在于，所述18-methyl-nandrolone的颗粒大小为100~200目。

3.根据权利要求1所述的微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法，其特征在于，所述转化液分离提取的方法包括以下步骤：

将所述转化液过滤分离，得转化滤液；

所述转化滤液经大孔树脂吸附、有机溶剂洗脱，得洗脱液；

将所述洗脱液浓缩、干燥，水洗、过滤，保留滤渣，得到11α-OH-18-methyl-nandrolone粗品；

将所述11α-OH-18-methyl-nandrolone粗品烘干后，完全溶解于乙醇中，加入活性炭脱色，过滤，得到11α-OH-18-methyl-nandrolone乙醇溶液；

将所述11α-OH-18-methyl-nandrolone乙醇溶液浓缩、冷冻析晶，过滤，收集滤饼，并于40~70℃条件下烘干，得到11α-OH-18-methyl-nandrolone精品。

4.根据权利要求3所述的微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇。

5.根据权利要求3所述的微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法，其特征在于，所述活性炭的加入量为所述原料18-methyl-nandrolone投料量的0.05倍~0.1倍。

6.根据权利要求3所述的微生物转化制备11α-OH-18-methyl-nandrolone的方法，其特征在于，所述冷冻析晶的温度为-10℃ ~ - 20℃。