[发明专利]一种运动障碍动物的建立方法及其用途

权利要求书

1.用于制备运动障碍动物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：

(1)使动物基因组中Prrt2基因降低表达或失活的试剂；所述的动物是啮齿类动物；

(2)用于对动物脑部进行蓝光激光刺激的试剂或装置；或用于对动物脑部进行脑损伤的装置。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，(2)中，所述的用于对动物脑部进行蓝光激光刺激的试剂或装置包括：表达光控阳离子通道基因的表达构建体，光纤插芯，蓝光激光器，脑立体定位仪和/或微量注射泵。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，(2)中，用于对动物脑部进行脑损伤的装置包括：

细棒状器械；或

手术导管以及与该导管相配套的导管内芯。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的细棒状器械为：针头，塑料棒或玻璃棒。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，(1)中，所述的使动物基因组中Prrt2基因降低表达或失活的试剂选自：

通过基因剔除实现Prrt2基因降低表达或失活的试剂；或

通过插入外源基因或基因片段实现Prrt2基因降低表达或失活的试剂。

6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，使动物基因组中Prrt2基因降低表达或失活的试剂是cas9基因编辑试剂。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的动物是小鼠，所述的cas9基因编辑试剂在Prrt2基因的编码序列的C666之后敲入终止密码子。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述的基因编辑试剂包括：

针对小鼠Prrt2的sgRNA，其序列如SEQ ID NO:2所示；

供体质粒，其包含如SEQ ID NO:3所示的序列。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述的基因编辑试剂还包括：在细胞内形成Cas9 mRNA的试剂。

10.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，使动物基因组中Prrt2基因降低表达或失活的试剂是TALEN靶向基因敲除试剂。

11.如权利要求10所述的试剂盒，其特征在于，所述的动物是大鼠，所述的TALEN靶向基因敲除试剂在Prrt2基因的翻译起始密码子ATG后删除10bp碱基序列。

12.如权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述的TALEN靶向基因敲除试剂的靶向序列如SEQ ID NO:4。

13.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的光纤插芯直径为0.2±0.1mm，蓝光激光器是BL473T3-050。

14.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的动物是鼠。

15.一种制备运动障碍动物的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)使动物基因组中Prrt2基因降低表达或失活；所述的动物是啮齿类动物；

(b)对(a)获得的动物，进行激光蓝光刺激或脑损伤，从而获得运动障碍动物。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，步骤(b)中，进行激光蓝光刺激包括：在动物的小脑或邻近的神经元组织中置入光纤插芯；利用蓝光激光器刺激2～20次。

17.权利要求16所述的方法，其特征在于，用蓝光激光器刺激6～15秒/次，间隔6～15进行第2次刺激。