[发明专利]血吸虫虫卵检测方法及该方法所用的试剂盒和引物

权利要求书

1.用于检测血吸虫虫卵的LAMP引物组，其特征在于，所述LAMP引物组包括F3和B3组成外引物对和FIP和BIP组成的内引物对以及LF环引物；

所述F3、B3、FIP以及BIP的核苷酸序列依次如SEQ ID NO: 1~4所示；

所述LF环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO: 5所示。

2.一种用于检测血吸虫虫卵的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的LAMP引物组、反应混合液以及DNA聚合酶和指示剂；

所述指示剂选自碘化丙啶、钙黄绿素或羟基萘酚蓝中的一种。

3.根据权利要求2所述的一种用于检测血吸虫虫卵的试剂盒，其特征在于，所述指示剂为羟基萘酚蓝，且所述羟基萘酚蓝加入所述反应混合液中，浓度为100μM~140μM。

4.根据权利要求3所述的用于检测血吸虫虫卵的试剂盒，其特征在于，所述反应混合液包括如下成分：

pH为8.6~9.0的15mM~25mM Tris–HCl、1.2mM~1.6mM dNTPs、8mM~12mM KCl、8mM~12mM(NH₄)₂SO₄、6mM~10mM MgSO₄、0.6M~1.0M甜菜碱以及体积百分数为0.07%~0.13%的Tween 20。

5.根据权利要求3所述的用于检测血吸虫虫卵的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为具有链置换作用的Bst DNA聚合酶，活性单位为14~18U/μL。

6.根据权利要求3所述的用于检测血吸虫虫卵的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括去离子水。

7.根据权利要求3所述的用于检测血吸虫虫卵的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准血吸虫DNA的阳性对照。

8.一种用于非疾病诊断目的的血吸虫虫卵的检测方法，其特征在于，包括：

提取待检测的血吸虫虫卵DNA，添加权利要求3~5任一项所述的试剂盒中的试剂组成反应体系进行恒温反应；反应过程中或反应后观察反应液中指示剂的颜色变化。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述反应体系中，F3、B3、FIP、BIP以及LF的摩尔比为1:1:（7~9）:（7~9）:（3~5）。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述恒温反应的条件为：

60℃~65℃恒温反应60min~80min。