[发明专利]一种硅藻rbcL基因分析方法及其在法医检测中的应用

说明书

发明公开了一种硅藻rbcL基因在判断溺亡者是否真正死于溺亡的应用。本发明中提供一对检测硅藻rbcL基因的引物对，还提供一种硅藻rbcL基因的分析方法，提取硅藻内核酸，利用权利要求2所述引物对上述核酸中rbcL基因进行扩增，利用扩增产物制备待测样本，对待测样本进行核酸分析。本发明还提供了将上述硅藻rbcL基因分析方法应用于法医检测中的应用，在溺亡者脏器中提取硅藻核酸并用PCR技术进行扩增，然后进行检测并与水样中的硅藻核酸进行比对，通过检出率和硅藻rbcL基因测序结果的比对，即可判断溺亡者是否真正死于溺亡，同时有助于找出真正的溺亡区域。

技术领域

本发明涉及法医学领域，具体涉及一种硅藻rbcL基因的分析方法及其在法医检测中的应用。

背景技术

在法医学检案实践中，时常遇到溺死相关案件的检验鉴定。由于我国江河湖海众多，环境复杂，以及尸体腐败等因素影响，水中尸体的死因鉴定一直是法医学实践中的难点之一。对于如何判断水中尸体是生前入水或死后抛尸入水，学界仍存在争议。硅藻检验一直是法医学实践中最常用的方法。目前硅藻检验的方法有很多，但国内常用的硅藻检验法主要基于硅藻形态学进行检测。然而随着分子生物学技术的发展，已有学者尝试通过PCR检测硅藻特异性的DNA条形码进行溺死的死因鉴定。DNA条形码是指利用短的标准DNA序列的核苷酸多样性进行物种的鉴定，利用DNA条形码进行硅藻检验可以避免形态学难以区分的藻类，消除人工观察和计数的实验误差。

与传统的硅藻形态学检验方法相比，PCR扩增技术检测硅藻DNA条形码用于溺死鉴定主要有以下优点：①检测特异性强，可用于不能用显微镜进行形态辨别的硅藻检验；②灵敏度高，所需样本量明显小于传统硅藻检验法；③可用于推断溺死地点和时间。利用硅藻DNA条形码的特异性，可以在定性的同时揭示群落特征，如进一步建立不同水域和同一水域不同时间硅藻生物群落特征变化监控系统，并与传统硅藻检验法相结合，对溺死鉴定则有更重要的实用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术中的缺陷和不足，提供了一种对硅藻rbcL基因（Large Subunit of Ribulose-1，5-bisphosphate carboxylaseoxygenase, rbcL）通用质体扩增区的分析方法，以及利用对硅藻rbcL基因的分析方法在法医检测中的应用，具体是在判断溺亡者真实死因上的应用。

叶绿体核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶大亚基基因(Large Subunit of Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase oxygenase, rbcL), 是叶绿体进行光合作用的关键基因片段，长度约1400 bp，在GenBank中，rbcL序列的信息比较齐全，出现内含子的概率较小，被广泛用于植物和藻类的分类研究。硅藻是一种广泛分布于水中的单细胞生物，细胞壁由大量硅物质组成，硅藻的种内繁多，形态各异，每一处水源的硅藻组成都不尽相同。因此，通过检测水中尸体各主要脏器内硅藻的存在不仅可成为判断是否生前溺死的重要证据之一，亦可对判断死亡地点具有重要意义。目前利用硅藻检验判定溺死的标准是肺脏，肝脏，肾脏等组织内发现硅藻，且硅藻种类与现场水样一致即可诊断为溺死。

本发明所要达到的技术效果通过以下方案实现：

本发明中提供一种硅藻rbcL基因在判断溺亡者是否真正死于溺亡的应用。