[发明专利]一种活性水凝胶及其制备方法和在手术创伤修复中的应用

权利要求书

1.一种活性水凝胶，其特征在于，包括以下组分：

脂肪间充质干细胞条件培养基、以壳聚糖和透明质酸为原料并通过交联反应制备的壳聚糖-透明质酸复合凝胶以及I型胶原。

2.一种制备根据权利要求1所述的活性水凝胶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、以剔除微血管和肌肉组织的大鼠腹股沟部脂肪组织为原料，培养脂肪间充质干细胞，进而制备脂肪间充质干细胞条件培养基；

步骤二、以壳聚糖和透明质酸为原料，在交联剂戊二醛的作用下，壳聚糖和透明质酸发生交联反应，制备壳聚糖-透明质酸复合凝胶；

步骤三、将所述脂肪间充质干细胞条件培养基和所述壳聚糖-透明质酸复合凝胶充分混匀，使所述脂肪间充质干细胞条件培养基的活性因子粘附在所述壳聚糖-透明质酸复合凝胶上，再加入I型胶原并混匀，得到活性水凝胶。

3.根据权利要求2所述的一种活性水凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，所述壳聚糖-透明质酸复合凝胶的制备过程为：

将壳聚糖和透明质酸溶于去离子水中，搅拌均匀后缓慢加入质量分数为2％的乙酸，使所述壳聚糖充分溶解在水中，得到混合液；

向所述混合液中加入交联剂戊二醛，搅拌均匀后在室温下静置，即得到壳聚糖-透明质酸复合凝胶。

4.根据权利要求3所述的一种活性水凝胶的制备方法，其特征在于，所述壳聚糖-透明质酸复合凝胶的制备过程为：

将15g/L的壳聚糖和1g/L的透明质酸溶于去离子水中，搅拌均匀后缓慢加入质量分数为2％的乙酸，使所述壳聚糖充分溶解在水中，得到混合液；

向所述混合液中加入4.8g/L的交联剂戊二醛，搅拌均匀后在室温下静置24小时，即得到壳聚糖-透明质酸复合凝胶。

5.根据权利要求4所述的一种活性水凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，将所述脂肪间充质干细胞条件培养基和所述壳聚糖-透明质酸复合凝胶充分混匀，使所述脂肪间充质干细胞条件培养基的活性因子粘附在所述壳聚糖-透明质酸复合凝胶上，再加入2mg/mL的I型胶原并混匀，得到活性水凝胶。

6.根据权利要求2所述的一种活性水凝胶的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，所述脂肪间充质干细胞条件培养基的制备过程为：

制备脂肪间充质干细胞：对剔除微血管和肌肉组织的大鼠腹股沟部脂肪组织进行无菌洗涤、剪碎以及使用无菌消化液消化大鼠腹股沟部脂肪组织中的组织块，并收集滤液；

将所得滤液与含有胎牛血清的低糖DMEM培养基等量中和，离心后弃掉上清液，得到沉淀物，并使用无血清培养基对其进行重悬后置于培养瓶中进行培养，当间充质干细胞生长至一定密度时，使用0.25％胰蛋白酶溶液消化间质干细胞，以1：3的接种比例接种到新的培养瓶中进行传代培养；

选择第三代培养的间质干细胞，在对数生长期，且细胞融合程度不超过80％时按照传代的要求消化、中和、洗涤、收集细胞，得到脂肪间充质干细胞；

制备脂肪间充质干细胞条件培养基：将脂肪间充质干细胞在培养瓶中培养到50-60％融合，收集条件培养基，将条件培养基在3000rpm下离心10min，移除细胞碎片，使用袋式过滤器并在一定条件下透析，将透析后的条件培养基浓缩20倍，制得脂肪间充质干细胞条件培养基。

7.根据权利要求6所述的一种活性水凝胶的制备方法，其特征在于，所述透析为：使用7-kDa分子量截止袋式过滤器在PEG 20000和4℃下对条件培养基进行透析。

8.一种根据权利要求2所述的活性水凝胶的应用，其特征在于，所述活性水凝胶用于修复手术创伤引起的肌肉和皮肤缺损。