[发明专利]葡萄糖脑苷脂酶基因检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明提供了一种葡萄糖脑苷脂酶基因检测方法及试剂盒，所述检测试剂盒包括用于特异性扩增葡萄糖脑苷脂酶基因上4个突变位点的引物对，4个突变位点分别为N188S、F213I、D409H和L444P，所述引物对包括公共上游引物和分型下游引物，所述分型下游引物包括野生型特异引物和突变型特异引物。应用本发明的试剂盒可以快速高效检测葡萄糖脑苷脂酶基因4个突变位点的基因型，是一种快速、简便、经济、高效的葡萄糖脑苷脂酶基因检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种葡萄糖脑苷脂酶基因检测试剂盒，及其检测方法。

背景技术

编码葡糖脑苷脂酶的基因(Glucocerebmsidas，以下简述GBA)突变会造成葡糖脑苷脂酶的缺乏，从而引起葡糖脑苷脂在肝、脾、骨骼和中枢神经系统的单核-巨噬细胞内蓄积而发病，产生肝脾肿大、骨骼畸形、生长发育落后、贫血等临床表现。

鉴于目前检测GBA的主要技术存在低通量、操作复杂、耗时长等缺点，本发明旨在提供一种高通量、操作简便、快速的检测试剂盒，以实现对GBA的基因筛查。

发明内容

本发明旨在提供一种高准确性、低成本、高通量、快速的检测试剂盒，可用于检测葡糖脑苷脂酶基因是否存在突变。

本发明所采取的技术方案是：

一种葡萄糖脑苷脂酶基因检测试剂盒，所述检测试剂盒包括用于特异性扩增葡萄糖脑苷脂酶基因上4个突变位点的引物对，4个突变位点分别为N188S、F213I、D409H和L444P，所述引物对包括公共上游引物和分型下游引物，所述分型下游引物包括野生型特异引物和突变型特异引物，对应4个突变位点的公共上游引物、野生型特异引物和突变型特异引物如下表所示：

表1、各个突变位点的引物序列

F代表公共上游引物，W代表野生型特异引物，M代表突变型特异引物。

优选地，每个公共上游引物的5'端标记有荧光基团。所述荧光基团是FAM、HEX、VIC、TAMRA、NED、ROX中的一种或多种。

本发明所述葡萄糖脑苷脂酶基因检测试剂盒还包括基因序列对照模板，所述基因序列对照模板包括正常序列模板和突变序列模板。所述基因序列对照模板是由两段人工合成的核苷酸序列。所述GBA基因的正常序列模板是根据NCBI上公布的GBA基因序列外显子6、9与10的部分序列人工合成的一段核苷酸序列。所述GBA基因的突变序列模板是根据上述正常序列修改突4个变位点碱基(c.680AG，c.754TA，c.1342GC，c.1448TC)后人工合成的核苷酸序列。

所述正常序列模板：