[发明专利]一种用于圆盘菌鉴定的标准基因及其应用

权利要求书

1.一种圆盘菌的DNA条形码标准基因，其特征在于,所述DNA条形码标准基因核苷酸序列如序列表中序列1所示的DNA分子序列。

2.应用权利要求1所述的一种圆盘菌的DNA条形码标准基因进行圆盘菌分子鉴定的方法，包括以下4个步骤：

(1) 从样品菌丝中提取基因组DNA；

(2) 以步骤(1)所提取的基因组DNA为模板，用圆盘菌通用外引物扩增，再用特异性内引物进行聚合酶链式反应，外引物序列为：正向引物ML7: 5' GACCCTATGCAGCTTCTACTG 3'，反向引物ML8: 5' TTATCCCTAGCGTAACTTTTATC 3'，内引物序列为：正向引物ML-chaoF: 5'AGAACAACGGCTAGGTGG 3'，反向引物ML-chaoR: 5' GAACGAGTCCGCAGAAGA 3'；

(3)对步骤(2)扩增得到的DNA产物进行测序；

(4) 将测序结果进行人工拼接和校正，与基因序列表中的圆盘菌的代表菌株序列SEQID NO.1进行同源性比对，若核苷酸差异个数在10个以下，即可将该样品鉴定为圆盘菌。

3.根据权利要求2所述的应用一种圆盘菌的DNA条形码标准基因进行圆盘菌分子鉴定的方法，其外引物扩增条件为：95℃预变性5min，94℃变性40s，37℃退火55s，如此低温退火2-3个循环，再将最终退火温度定格于50℃，55s，72℃延伸1min，如此进行30个循环，最后72℃延伸10min，4℃保存； 内引物扩增条件为：95℃预变性5min，94℃变性40s，退火温度为55℃-50.5℃逐渐降低0.5℃，共计11个循环，最后将退火温度定格在50℃，25个循环，72℃延伸1min，如此进行30个循环，最后72℃延伸10min，4℃保存。