[发明专利]猪流行性腹泻病毒特异性SIgA ELISA检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)特异性SIgA ELISA检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒包括抗SIgA SC片段的单克隆抗体，所述的单克隆抗体由微生物杂交瘤细胞株2F9分泌产生，所述的杂交瘤细胞株2F9保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其微生物保藏号是：CGMCC No.13813。本发明以初乳中纯化出的SIgA为抗原，免疫BalB/C小鼠，获得一株稳定分泌针对于SIgA分子分泌片(SC)的杂交瘤细胞株，并建立了检测PEDV特异性SIgA抗体的ELISA方法及试剂盒，实验证明，该方法具有较好的特异性和敏感性。本发明的提出为进一步研究猪感染PEDV和PEDV疫苗免疫后特异性SIgA水平及黏膜免疫评价提供了有效的技术手段。

技术领域

本发明涉及一种ELISA检测试剂盒及其应用，特别涉及一种用于猪流行性腹泻病毒特异性SIgA检测的ELISA检测试剂盒及其在评价PEDV感染及免疫状态中的应用。本发明属于医药技术领域。

背景技术

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)等病原引起的猪的肠道疾病。PED已成为危害世界养猪业的重要疾病之一，给养猪业带来重大经济损失。PEDV主要引起仔猪腹泻、脱水和死亡。经粪口途径传播是其主要的传播方式。到目前为止，检测PEDV感染和接种疫苗后常用的方法有基于RNA的RT-PCR、实时定量PCR、多重PCR和RT-环介导等温扩增技术，以及检测抗体的IgG和IgA检测方法，检测病原的间接免疫荧光方法和电镜技术。

PEDV感染猪只后不会出现病毒血症，血清中的各类抗体不能有效清除病毒，但对IgG和IgA抗体的检测能够有效评估免疫状况和自然感染状况。PEDV感染的靶器官是仔猪小肠绒毛膜上皮细胞。黏膜免疫系统是机体的第一道防线，而黏膜免疫系统中病原特异性的分泌型IgA(SIgA)抗体能有效中和病毒、阻断病原体与机体接触，促进病原体排出体外。SIgA主要存在于消化道、呼吸道及生殖道的黏膜表面以及初乳中，由分泌片(SC)、两个IgA分子和联接链(J)组成，SC片段能够覆盖IgA分子中的蛋白酶酶切位点，从而保证了SIgA分子的稳定性。因此，机体内PEDV特异性SIgA水平是评价机体能否有效阻断PEDV感染的重要指标。鉴于此，本发明建立了能够评价PEDV感染及免疫状态的SIgA检测试剂盒及其检测方法。

发明内容

本发明的目的之一是提供一株能够稳定分泌抗SIgA SC片段单克隆抗体的杂交瘤细胞株，由该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体及其在检测SIgA中的用途。

本发明的目的之二是提供一种用于PEDV特异性SIgA检测的ELISA检测试剂盒、检测方法及其在评价PEDV感染及免疫状态中的应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明以初乳中纯化出的SIgA为抗原，免疫BalB/C小鼠，获得一株稳定分泌抗SIgA SC片段单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述的杂交瘤细胞株，命名为2F9，分类命名为小鼠抗猪SIgA SC片段单克隆抗体细胞株，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，其微生物保藏号是：CGMCC No.13813，保藏时间是：2017年3月20日。

由所述的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体也在本发明的保护范围之内。

进一步的，本发明还提出了所述的单克隆抗体在制备检测特异性SIgA试剂中的用途。

本发明的一种PEDV特异性SIgAELISA检测试剂盒，包括抗SIgASC片段的单克隆抗体，所述的单克隆抗体由杂交瘤细胞株2F9分泌产生。

在本发明所述的试剂盒中，优选的，所述的抗SIgA SC片段的单克隆抗体是用辣根过氧化物酶标记的。