[发明专利]猪流行性腹泻病毒特异性SIgA ELISA检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)特异性SIgA ELISA检测试剂盒，其特征在于包括抗SIgA SC片段的单克隆抗体，所述的单克隆抗体由杂交瘤细胞株2F9分泌产生，所述的杂交瘤细胞株2F9保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其微生物保藏号是：CGMCC No.13813。

2.如权利要求1所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于所述的抗SIgA SC片段的单克隆抗体是用辣根过氧化物酶标记的。

3.如权利要求1所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于还包括由纯化的PEDV粒子包被的酶标板、稀释液、洗涤液、阳性对照、阴性对照、ABTS显色液以及终止液。

4.如权利要求3所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于所述的阳性对照为PEDV SIgA抗体阳性的猪直肠拭子或初乳样品，所述的阴性对照为PEDV SIgA抗体阴性的猪直肠拭子或初乳样品。

5.如权利要求3所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于所述的酶标板上，PEDV粒子的包被浓度为5.8ng/孔。

6.如权利要求3所述的ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的PEDV粒子为PEDV-LNCT2病毒粒子。

7.如权利要求1-6任一项所述的试剂盒，其特征在于用于PEDV特异性SIgA检测时，按照以下步骤进行：

(1)从冰箱取出试剂盒，室温放置30分钟；

(2)取出酶标板，分别设置阳性对照孔、待测样品孔、阴性对照孔和空白对照孔，记录各孔位置，待检样品及标准阳性对照样品、标准阴性对照样品分别用稀释液做1：100稀释后，分别加入待测样品孔、阳性对照孔、阴性对照孔，空白对照孔不加；

(3)置37℃恒温箱作用1h；

(4)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加洗涤液，静置，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板2-3次；

(5)每孔加入按照1：3000倍稀释的辣根过氧化物酶标记的抗SIgA SC片段的单克隆抗体，空白对照孔不加；

(6)37℃恒温箱作用1h；

(7)弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加洗涤液，静置，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板2-3次；

(8)每孔中加入ABTS显色液，混匀，37℃避光显色15min；

(9)终止：每孔中加入终止液终止反应。

(10)测定：以空白孔调零，用酶标仪在405nm波长下测定各孔吸光值；

(11)结果判定

直肠拭子：OD₄₀₅值0.261判为阳性，OD₄₀₅值≤0.261判为阴性；

初乳样品：OD₄₀₅值0.305判为阳性，OD₄₀₅值≤0.305判为阴性。

8.权利要求1-7任一项所述的试剂盒在制备检测PEDV特异性SIgA试剂中的用途。

9.一株稳定分泌抗SIgA SC片段单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2F9，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，其微生物保藏号是：CGMCC No.13813，保藏时间是：2017年3月20日。

10.由权利要求9所述的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。

11.权利要求10所述的单克隆抗体在制备检测特异性SIgA试剂中的用途。