[发明专利]一种菌核曲霉及其制备青霉酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种菌核曲霉及其制备青霉酸的方法，属于生物技术领域。

背景技术

青霉酸主要是曲霉菌(A.sclerotiorum,A.ostianus,A.terreus,A.ochraceus)和青霉菌(P.melinii,P.brasilianum,P.puberulum,P.cyclopium)的次级代谢产物，具有广泛的生物活性。

青霉酸对多株肿瘤细胞具有较强的抗肿瘤活性，对人乳腺癌高转移细胞(MDA-MB-435)和人肝腹水腺癌细胞(HCT-8)的IC₅₀分别为4.43和8.76μg/ml(Chem.&Biodiv.2012,9(10),2203-2209)；对人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)、人乳腺癌(MCF-7)、人神经癌细胞(SF-268)、胰腺癌(MIA Pa Ca-2)和人胚肺细胞(WI-38)的IC₅₀分别为5.80、12.80、20.00、8.00和57.50μM(J.Nat.Prod.2004,67,1985-1991)；对小鼠骨肉瘤细胞株(POS1)的IC₅₀为7.8μM(J.Nat.Prod.2013,76,297-301)；对人胃癌细胞(MKN45)、结肠癌细胞(LOVO)、人肺腺癌细胞系(A549)、人乳腺癌高转移细胞(MDA-MB-435)、人肝癌细胞(HepG2)和人急性早幼粒白血病细胞(HL-60)的IC₅₀分别为2.85、2.21、7.46、6.28、3.67和0.80μg/mL(Appl.Microbiol.Biotechnol.2013,97(17),7617-7625)。

青霉酸还具有较强的抑菌作用，对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia)、鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和哈氏弧菌(Vibrio harveyi)的最小抑菌浓度(MIC)分别为：1.0、32和0.5mg/mL(Phytochem.Lett.2015,12,232-236)；对金黄色酿脓葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大肠杆菌(Escherichia coli)的最小抑菌浓度均为128g/mL(Phytochem.2017,137,165-173)。

青霉酸具有抗疟疾的活性，其IC₅₀为16.8μM(Phytochem.2017,137,165-173)。青霉酸具有很强的除草(Japan Patent 08-053310，1996)和调节植物生长的活性(Phytochem.2005,66,1012-1016)。

申请人在研究菌核曲霉(A.sclerotiorum)JH42的液态摇床发酵产物的过程中发现该菌可以大量产生青霉酸，可规模化生产，对青霉酸在医药和工农业生产中的开发、研究和应用具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高产青霉酸的菌核曲霉，及其制备青霉酸的方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种菌核曲霉，分类命名为(Aspergillus sclerotiorum)，株号为JH42，已于2017年01月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，其保藏编号为CGMCC NO.13562，18s rRNA序列如序列表所述。

菌核曲霉是从山东省沾化县套尔河东沙子岛附近盐碱地土壤样品中分离、纯化获取得到，其获取方法包括以下具体步骤：

⑴.将盐碱地土壤样品与无菌陈海水按照质量比1:5混合，充分搅拌；

⑵.取0.5mL上述混合物均匀涂布在PDA培养基中，后放于28℃恒温箱中培养，待菌落长出后根据菌株的形态特征进行挑选，即得菌核曲霉菌株，并命名为JH42。

菌核曲霉制备青霉酸的方法，菌核曲霉JH42经发酵得到含有青霉酸的发酵物，发酵物经提取纯化得到青霉酸。

菌核曲霉制备青霉酸的方法，包括如下具体步骤：

⑴.将菌核曲霉JH42种到PDA培养基上，在28℃培养箱中培养7天，得到种子；

⑵.将步骤⑴制备的种子接种到液体发酵培养基中扩大培养，得到发酵物；

⑶.发酵物经分离得到发酵液和菌丝体，将发酵液经萃取剂萃取，菌丝体用浸提剂浸提，后减压浓缩至不含浸提剂，再用萃取剂萃取；

⑷.发酵液萃取液和菌丝体萃取液合并，减压浓缩操作得浸膏；