[发明专利]一种鉴定栽培燕麦母本的方法

说明书

本发明提供了一种鉴定栽培燕麦母本的方法，步骤包括：(1)提取待测栽培燕麦的总DNA；(2)以步骤(1)提取的总DNA为模板进行PCR扩增；PCR扩增的引物对序列为SEQ ID No.1和SEQ ID No.2；(3)通过PCR扩增产物的核苷酸序列鉴定栽培燕麦的母本。本发明还提供了鉴定栽培燕麦母本的专用引物对，以及含有该专用引物对的试剂盒。本发明利用分子学手段对栽培燕麦进行鉴定，避免了利用形态学方法进行鉴定时存在的证据不足等问题，实现了对栽培燕麦的遗传资源更加合理、准确的鉴定。

技术领域

本发明涉及鉴定植物品种的方法，具体属于一种鉴定栽培燕麦母本的方法。

背景技术

燕麦是世界性的古老粮草兼用作物，更是糖尿病患者的专属食材。因其富含一种水溶性膳食纤维(β-葡聚糖)，对预防和治疗人类“三高症”具有显著功效，而受到全世界的热捧。目前，世界各地的燕麦栽培品种已达数百种；在我国，自六七十年代起，已经育成的燕麦栽培品种也有上百种。然而栽培燕麦的品质和产量却没有因为品种的增多而得到改善。因此，鉴定栽培燕麦的亲本，厘清燕麦栽培品种间的亲缘关系，提高燕麦育种工作的效率一直是人们关注的内容。目前燕麦品种培育中用的亲本都是通过对一些形态特征的筛选而确定的，这些形态特征可能是由环境的影响造成的，并不能在后代中遗传，因此降低了育种效率，浪费了大量的人力和财力。

叶绿体DNA(cpDNA)具有拷贝数高、分子量小、无组织特异性、进化速度快等特点，在遗传上具有自主性，是严格的母系遗传。ccsA-ndhD是叶绿体DNA中变异速率较快的一个片段，研究发现，ccsA-ndhD的碱基替换速率比cpDNA分子的其它区域高5-10倍。这一片段具有很多的信息位点，在揭示种内不同个体之间遗传差异方面有广泛的应用，利用cpDNAccsA-ndhD碱基突变来鉴定不同群体、个体的亲缘关系已经在人参、山药、藻类等多种植物中开展。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定栽培燕麦母本的方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于鉴定栽培燕麦母本的专用引物对，是SEQ ID No.1和SEQ ID No.2。

一种用于鉴定栽培燕麦母本的试剂盒，它包括所述专用引物对；还可包括PCR扩增的常规试剂，如缓冲液、dNTP、Taq酶等。

一种鉴定栽培燕麦母本的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测栽培燕麦的总DNA；

(2)以步骤(1)提取的总DNA为模板进行PCR扩增；PCR扩增的引物对序列为SEQ IDNo.1和SEQ ID No.2；

(3)通过PCR扩增产物的核苷酸序列鉴定栽培燕麦的母本。

所述栽培燕麦的总DNA的提取方法可为标准的CTAB法。

所述PCR扩增的反应体系可以如下：双蒸水23.1ul；10×tris-HCl缓冲液(pH8.3，500mM KCl,15mM MgCl₂)3ul；dNTP(2.5mM)0.7ul；SEQ ID No.1和SEQ ID No.2各1ul；Taq酶(5U/ul)0.2ul；DNA模板1ul(30ng)。

所述PCR扩增的程序具体可为：94℃--5分钟；然后以94℃--10秒，60℃--20秒，72℃--30秒，循环35次；最后在72℃保温5分钟。

所述专用引物对、所述试剂盒或所述方法均可应用于栽培燕麦遗传资源鉴定。

本发明针对叶绿体ccsA-ndhD设计了一对专用引物，该专用引物可以分析栽培燕麦的母本，从而对栽培燕麦的遗传资源进行鉴定，避免了利用形态学原理进行鉴定时存在的证据不足等问题，可实现对栽培燕麦的遗传资源进行更加合理、准确的鉴定。

附图说明