[发明专利]一种以核酸适配体检测ATP的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明提供一种以核酸适配体检测ATP的试剂盒及其检测方法。所述的试剂盒，其包括序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核酸适配体以及四甲基罗丹明(TMR)标记的ATP。本发明基于核酸适配体的荧光偏振(荧光各向异性)对ATP实现检测，具有操作简单，检测迅速、灵敏度高、精确度高和重现性好的优点，不易受荧光强度波动、荧光漂白的影响。与色谱等方法相比，无需昂贵的仪器设备，操作步骤简单，只需要简单的样品混合就可进行测定。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种以核酸适配体检测ATP的试剂盒及其检测方法。

背景技术

三磷酸腺苷(ATP)是生物体内重要的活性分子，发挥着多种功能。ATP是一种高能磷酸化合物，通过与二磷酸腺苷(ADP)的转化实现储能和放能，为细胞的生命活动提供能量。在细胞的生理功能中，ATP在调控细胞代谢和生物反应过程中起着关键作用。ATP还参与构建蛋白质分子、主动输运离子和神经电信号传导等多种生理功能。监测ATP可用于指示细胞的活性和细胞损伤。而且，ATP的含量也经常被用于测定微生物的活性、鱼的新鲜度等。ATP也在信号转导中有重要功能。因此，检测ATP分子在基础研究和生产实践等方面有重要意义，也有多方面的需求。ATP的常用检测方法包括基于酶反应的方法、色谱法、生物传感法等。

荧光偏振(fluorescence polarization)或荧光各向异性(fluorescenceanisotropy)分析具有重现性好、灵敏、操作简单、易于高通量分析等特点。荧光偏振分析/荧光各向异性分析采用偏振的激发光来激发荧光分子，测定偏振发射荧光在垂直方向的荧光强度I_⊥和水平方向的荧光强度I_∥，然后根据相应的公式计算出荧光偏振值或荧光各向异性值。荧光偏振值P等于(I_∥-I_⊥)/(I_∥+I_⊥)，而荧光各向异性值r等于(I_∥-I_⊥)/(I_∥+2I_⊥)。荧光偏振和荧光各向异性值是没有量纲的比值，因此不受荧光强度波动的影响，测定具有很好的精确性和重现性。荧光偏振分析/荧光各向异性分析中往往需要采用荧光染料标记分子，荧光染料标记分子在分子相互作用或反应中分子转动发生变化时会引起荧光偏振信号和荧光各向异性信号的变化。荧光偏振分析/荧光各向异性分析在分子间相互作用分析、临床药物检测、药物筛选、配体筛查等方面有重要的应用。常用的荧光偏振/荧光各向异性分析法检测小分子往往需要采用免疫抗体作为识别试剂构建检测方法，但免疫抗体在制备、稳定性、成本方面存在着局限性。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种以核酸适配体检测ATP的试剂盒及其检测方法，以期解决上述现有技术中存在的至少部分技术问题。

为实现上述目的，本发明提供一种以核酸适配体检测ATP的试剂盒，其包括序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核酸适配体以及四甲基罗丹明(TMR)标记的ATP。

本发明还提供一种检测ATP的方法，其是将序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核酸适配体、四甲基罗丹明标记的ATP与待测样本混合后温育，测定TMR的荧光各向异性变化值或荧光偏振变化值。

与现有技术相比，本发明的积极进步效果在于：

本发明基于核酸适配体的荧光偏振(荧光各向异性)对ATP实现检测，其不同于以往的传统的需要采用免疫抗体作为亲和配体的荧光偏振检测小分子的方法。免疫抗体的制备成本高，稳定性差，批间重现性差，易失活。核酸适配体序列可以通过化学方法合成制备、合成成本低、具有很好的热稳定性，便于储存和运输，货架寿命长，不易失活。荧光偏振分析方法具有操作简单，检测迅速、灵敏度高、精确度高和重现性好的优点，不易受荧光强度波动、荧光漂白的影响。与色谱等方法相比，无需昂贵的仪器设备，操作步骤简单，只需要简单的样品混合就可进行测定。

附图说明