[发明专利]一种磁性凝集素载体的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种磁性凝集素载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将FeSO₄·4H₂O和FeCl₃·6H₂O按照摩尔比1:1～1:5溶于蒸馏水中，然后转移至三颈圆底烧瓶中，在40～80℃，搅拌和氮气保护条件下，迅速加入10-40％的NH₄OH调节溶液至碱性，反应5-20min后，加入油酸，再搅拌反应25-50min后，获得的黑色沉淀用无水乙醇和超纯水反复清洗至上清液无色透明，强磁铁沉淀分离，于真空烘箱中烘干，得到油酸磁性纳米颗粒称为Fe₃O₄@OA；

(2)称取一定量的多巴胺盐酸盐溶解于缓冲溶液中，配制成1～10mg/mL的多巴胺盐酸溶液，将步骤(1)制备的油酸磁性纳米颗粒研磨均匀加入到多巴胺盐酸溶液中，超声10～50min，然后置空气中搅拌7～12h，搅拌结束后，用磁铁分离，获得的深棕色沉淀用乙醇和蒸馏水清洗，于真空烘箱中烘干，得到磁性纳米颗粒称为多巴胺功能化磁性纳米载体，记为Fe₃O₄@OA@DP；

(3)将刀豆凝集素conA溶解于结合缓冲溶液中，得到一定浓度的刀豆凝集素conA储备液，取一定浓度的储备液，加入到步骤(2)中制备的Fe₃O₄@OA@DP纳米粒子中进行反应，反应结束后离心除去上清液，得到Fe₃O₄@OA@DP@conA磁性载体。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述油酸体积为总溶液体积的0.1～1％。3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述多巴胺盐酸溶液的浓度为0.5-3.0mg/mL；缓冲液为柠檬酸盐缓冲溶液，磷酸盐缓冲溶液或者Tris-HCl盐缓冲溶液，pH为4.0-9.0。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述反应前超声时间为20～40min。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，真空烘箱中烘干温度均为50℃。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述刀豆凝集素conA储备液浓度为0.5-5g/L；结合缓冲液为含有1mM Ca²⁺和1mM Mn²⁺的柠檬酸盐缓冲溶液，磷酸盐缓冲溶液或者Tris-HCl盐缓冲溶液，pH为4.0-9.0。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述反应温度为4-25℃，反应时间为1-8h。

7.如权利要求1～6所述的制备方法制备得到的磁性凝集素载体，将其应用于全细胞的固定化。

8.根据权利要求7所述的磁性凝集素载体应用于全细胞固定化的方法，其特征在于，

具体应用方法为：

将细胞悬浮于结合缓冲溶液中，并测量初始OD₆₀₀值，将1-8mL的细胞悬浮液加入到上述制备的10～30mg Fe₃O₄@OA@DP@conA磁性载体中，在0-25℃下反应0.5-6h，强磁铁分离，测量上清液OD值，清洗2-3次，均测量上清液OD值，并计算固定化效率。

9.如权利要求8所述的磁性凝集素载体应用于全细胞固定化的方法，其特征在于，所述全细胞为重组大肠杆菌细胞，所述结合缓冲液为含有1mM Ca²⁺和1mM Mn²⁺的柠檬酸盐缓冲溶液，磷酸盐缓冲溶液或者Tris-HCl盐缓冲溶液，pH为4.0-9.0。