[发明专利]蛋白质及其在制备隐丹参酮中的应用有效
申请号: | 201710342119.0 | 申请日: | 2017-05-16 |
公开(公告)号: | CN108866016B | 公开(公告)日: | 2021-11-02 |
发明(设计)人: | 黄璐琦;郭娟;马莹;马晓惠;崔光红;曾雯 | 申请(专利权)人: | 中国中医科学院中药研究所 |
主分类号: | C12N9/02 | 分类号: | C12N9/02;C12N15/82;C12P33/00 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
地址: | 100700 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 蛋白质 及其 制备 丹参 中的 应用 | ||
1.隐丹参酮的制备方法,包括下述M1)或M2):
M1)利用蛋白质与丹参新酮进行反应得到隐丹参酮;所述蛋白质为下述A1)或A2):
A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质;
A2)在A1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质;
M2)利用重组微生物与丹参新酮进行反应得到隐丹参酮;所述重组微生物为下述B1)至B4)中的任一种:
B1)含有编码所述蛋白质的核酸分子的重组微生物;
B2)含有表达盒的重组微生物,所述表达盒含有编码所述蛋白质的核酸分子;
B3)含有重组载体的重组微生物,所述重组载体含有编码所述蛋白质的核酸分子;
B4)含有重组载体的重组微生物,所述重组载体含有B2)中所述表达盒;
M2)中所述反应的反应体系为向100 mM、pH 7.5的Tric-HCl中添加NADPH、FAD、FMN、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、DTT、所述重组微生物和丹参新酮得到的液体,其中,NADPH、FAD、FMN、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、DTT的浓度分别为500 μM、5 μM、5μM、4 mM、4 mM、2 mM。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:B1)所述核酸分子为编码序列是序列表中SEQ ID No.1的cDNA分子或DNA分子。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述重组微生物为酵母。
4.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:M2)包括利用所述重组微生物的发酵产物制备的微粒体与丹参新酮进行反应得到隐丹参酮。
5.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述方法还包括从所述反应的反应产物中纯化得到隐丹参酮。
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