[发明专利]骨化二醇发酵的补料培养基、发酵的补料方法及其发酵方法

说明书

本发明公开一种骨化二醇发酵的补料培养基、发酵的补料方法及其发酵方法，所述补料培养基包括：有机氮源0.2～3.0g/100ml、无机氮源0.2～3.0g/100ml、碳源0.5～3.0g/100ml、无机盐A 0.1～1.0g/100ml、无机盐B 0.1～1.0g/100ml、微量元素0.0002～0.0006g/100ml。所述补料方法和所述发酵方法中包括向发酵液中加入所述补料培养基和水，满足了骨化二醇发酵对营养成分的需求，满足了骨化二醇发酵溶氧需求，降低了动力成本，提高了发酵效率。

技术领域

本发明生物技术涉及领域，具体涉及一种骨化二醇发酵的补料培养基、发酵的补料方法及其发酵方法。

背景技术

维生素D类药物中的骨化二醇(25—羟基维生素D₃)是自然存在人体内的维生素D₃的活性代谢产物，应用广泛。其主要用于治疗老年人骨质疏松症等各种慢性骨紊乱，以及与慢性肾衰竭有关的代谢性骨疾病，低钙血病。此外，骨化二醇近年还作为饲料添加剂用于饲料行业。

骨化二醇的制备有化学合成和生物发酵两种方法；化学合成反应步骤繁多、需要昂贵试剂、反应过程中会产生外消旋体，需要进行复杂的拆分过程，不仅大大影响收率，而且难以拆分完全，而且化学合成生产骨化二醇会对环境产生较大的污染。而微生物发酵的方式能够利用微生物细胞内的酶特异性的解决骨化二醇的手性结构问题，其生产条件温和，收率高，成本低廉，环境友好，成为一种有效替代化学合成的方法。但是微生物发酵的方式实施过程中也存在一些问题，在发酵过程中，发酵时间长，可能会出现营养供应不足的情况，同时，由于发酵的时间长，发酵液蒸发量大，体积减少较多，使得发酵液粘度增加、氧传递受限，菌丝体过早出现断裂、自溶，发酵液的pH值出现升高的情况，这又会影响菌丝体内酶的活性，造成的结果就是底物维生素D₃的残留较多，产物骨化二醇的产量增长缓慢，发酵时间长，导致发酵效率不高。

发明内容

有鉴于此，本申请提供了一种骨化二醇发酵的补料培养基、发酵的补料方法及其发酵方法，所述补料方法和所述发酵方法中包括向发酵液中加入所述补料培养基和水，提供了补料培养基配方、补料时间和补料速率，并且将氨基酸作为补料培养基组分，满足了骨化二醇发酵对营养成分的需求，满足了骨化二醇发酵溶氧需求，降低了动力成本，提高了发酵效率。

解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是一种骨化二醇发酵的补料培养基，所述补料培养基包括：有机氮源0.2～3.0g/l00ml、无机氮源0.2～3.0g/l00ml、碳源0.5～3.0g/l00ml、无机盐A 0.1～1.0g/l00ml、无机盐B 0.1～1.0g/l00ml、微量元素0.0002～0.0006g/l00ml。

优选的，所述补料培养基包括：有机氮源0.2～1.0g/l00ml、无机氮源0.2～1.0g/l00ml、碳源0.5～1.0g/l00ml、无机盐A 0.1～0.3g/l00ml、无机盐B 0.1～0.3g/l00ml、微量元素0.0002～0.0004g/l00ml。

优选的，所述补料培养基包括：有机氮源0.5g/l00ml、无机氮源0.2g/l00ml、碳源0.5g/l00ml、无机盐A 0.2g/l00ml、无机盐B 0.2g/l00ml、微量元素0.0003g/l00ml。

优选的，所述有机氮源选自蛋白胨、黄豆粉、花生粉、玉米浆和酵母膏中的一种或多种，所述无机氮源选自硫酸铵、硝酸铵、尿素和氨中的一种或多种，所述碳源选自葡萄糖、麦芽糖、淀粉、糊精和蔗糖中的一种或多种，所述无机盐A选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠中的一种或多种，所述无机盐B选自硫酸镁、硫酸钠和硫酸钾中的一种或多种，所述微量元素选自氯化铁、硫酸铜和氯化锰中的一种或多种。

优选的，所述有机氮源为蛋白胨。

优选的，所述的无机氮源为硫酸铵。

优选的，所述碳源为葡萄糖。