[发明专利]四色TORCH荧光检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种TORCH荧光检测试剂盒，特别涉及一种四色TORCH荧光检测试剂盒。

背景技术

TORCH是指可导致先天性宫内感染及围产期感染而引起围产儿畸形的病原体，在妇女孕前和孕期能够引起宫内和胎儿感染的微生物主要有弓形体 (Toxoplasma gondii，Toxo) 、风疹病毒 (Rubella Virus，RV)、巨细胞病毒(Cytomegalovirus，CMV)、单纯疱疹 I 型和 II 型病毒 (Herpes Simplex Virus，HSV) 五种，他们对优生优育的危害比较严重。1971 年Nalmias 特就这几个微生物英文名称的第一个字母撰造出“TORCH”一词，To 代表弓形体；R 代表风疹病毒；C 代表巨细胞病毒；H 代表单纯疱疹 I 型和 II 型病毒。TORCH 感染在围产医学中称之为“ToRCH 综合症”。这组微生物感染有着共同的特征，即可造成母婴感染。孕妇由于内分泌改变和免疫力下降易发生原发感染，既往感染的孕妇体内潜在的病毒也容易被激活而发生复发感染。孕妇发生病毒血症时，病毒可通过胎盘或产道传播感染胎儿，引起早产、流产、死胎或畸胎等，以及引起新生儿多个系统、多个器官的损害，造成不同程度的智力障碍等症状。特别在怀孕初的三个月胚胎处于器官形成期，此时受病毒感染，可破坏细胞或抑制细胞的分裂和增殖。器官形成期以后感染病毒，可破坏组织和器官结构，并可形成持续感染，出生后继续排毒，能引起相应的病变。其中弓形虫寄生于细胞内，随血液流动，到达全身各部位，破坏大脑、心脏、眼底，致使人的免疫力下降；风疹病毒主要通过呼吸道传播，孕妇感染后能使胎儿致畸，病毒通过胎盘感染胎儿形成先天性感染，称为先天性风疹综合症( CRS )，主要是先天性白内障、先天性心脏病和神经性耳聋，风疹感染发生在孕期越早，胎儿的致畸也越严重；巨细胞病毒感染能引起宫内胎儿生长迟缓、小头形、脑炎、视网膜脉膜炎、黄疸、肝脾肿大、溶血性贫血等，新生儿死亡率较高；怀孕早期感染单纯疱疹病毒( HSV I、II型 )能破坏胚芽面导致流产，孕中晚期虽少发畸胎，但可引起胎儿和新生儿发病。TORCH的感染影响着人口素质，与优生优育有重要关系。目前，临床上最常用的TORCH检测是ELISA法，常规的ELISA检测的是抗体，常检测IgM和IgG抗体，即可判断近期感染( IgM指标)，又可检测人群抗体(免疫力)水平( IgG指标 )，但是如果要对5种病原体进行检测，就需要十几种试剂盒才能将所有的IgM和IgG检测完毕，每次反应只能检测一个指标，速度慢，效率低，费用昂贵，需要样本量大，并存在一定的窗口期，可能导致假阴性。

现有的运用荧光PCR方法进行TORCH病原体检测的技术的缺点主要是扩增灵敏度低，耗时长。前期一般都需要经过步骤繁琐的核酸提取，然后运用普通Taqman探针的方法进行多重PCR扩增，而且一般都是FAM和HEX两通道检测，所以一管只能检测一种病原体，难以满足实际使用的需要。

开发出可以快速、高效的四色TORCH荧光检测试剂盒，具有非常实际的意义。

发明内容

本发明主要是提供一种四色TORCH荧光检测技术，能够解决现有技术扩增灵敏度低、耗时长等问题。

本发明所采取的技术方案是：

四色TORCH荧光检测试剂盒，包括DNA提取液、热启动Taq酶系统、引物、荧光探针、阴性对照和阳性对照，荧光探针为TORCH特异性MGB探针，TORCH特异性MGB探针的序列如下：

探针1 CATCGCGTCTGTAGTCCCCTTCGA （SEQ ID NO：1）

探针2 CGAATTGCCACGGCCCCGA （SEQ ID NO：2）

探针3 AGCCATCCACATCTCCCGCTTATCCTC （SEQ ID NO：3）

探针4 TGGGGTTGGGTGGTGGAGGAGA （SEQ ID NO：4）

探针5 CGACACCCTCCATACTGCCGAAG （SEQ ID NO：5）；

上述探针的3’端连接有MGB，5’端连接有荧光基团，其中，四色TORCH荧光检测试剂盒探针1用于检测弓形虫；探针2用于检测风疹病毒；探针3用于检测巨细胞病毒；探针4～5用于检测单纯疱疹 I 型和 II 型病毒。

优选的，上述四色TORCH荧光检测试剂盒中所使用的通用引物为：

引物1 TCATCTACAGTCCTGATATCTCTCCT （SEQ ID NO：6）

引物2 GGAGCCACAGAAGGGACAG （SEQ ID NO：7）