[发明专利]一种检测感染性腹泻病原体的引物组合物及其试剂盒

说明书

本发明涉及一种用于检测感染性腹泻病原体的引物组合物，其包括轮状病毒引物组、肠道腺病毒引物组、诺如病毒引物组、沙门氏菌引物组、志贺氏菌引物组和空肠弯曲菌引物组中的至少一组；还涉及一种包含该引物组合物的试剂盒，其还包括包被引物的微流控芯片、恒温扩增反应液、恒温扩增酶溶液、阴性对照物；还涉及一种采用上述引物组合物的检测方法，包括引物组合物的包被、待检样品核酸提取、LAMP反应和结果判读。本发明提供的试剂盒能够在1小时内快速、准确地检测感染性腹泻病原体，对于快速辅助指导治疗和用药也具有重要意义；该多指标的检测也可以用于地域性的流行病学调研和疫情监控，以研究感染性腹泻在中国的流行情况。

技术领域

本发明属于核酸扩增技术领域，具体涉及一种用于检测感染性腹泻病原体的引物组合物，以及基于微流控芯片系统的检测感染性腹泻病原体的试剂盒及其方法。

背景技术

感染性腹泻是全球最常见的一类疾病，每年全世界估计有320万≤5岁的儿童死于腹泻，占同龄儿童死因的24.8％；在发展中国家，每年每儿童患病1-12次，发达国家，每年每儿童患病1-5次，由此可见，感染性腹泻仍是当前一类重要的疾病。感染性腹泻是指各种急性、慢性的细菌、病毒、真菌、寄生虫感染引起肠道炎症所致的腹泻。我们也把除霍乱、细菌性和阿米巴性痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻，称为感染性腹泻，是《中华人民共和国传染病防治法》中规定的丙类传染病。

感染性腹泻的病原体有细菌、病毒、寄生虫、真菌等。目前，在我国主要以细菌和病毒为主，病毒类有轮状病毒、诺如病毒、腺病毒和柯萨奇病毒等，细菌类主要为沙门氏菌、志贺氏菌、空肠弯曲菌等；具文献报告，病毒性感染占感染性腹泻90％左右，细菌占10％左右；病毒中有95％以上为轮状病毒和(或)腺病毒、诺如病毒引起，细菌以沙门氏菌、空肠弯曲菌和志贺氏菌为主，占90％以上。感染性腹泻是我国临床上最常见的疾病之一，重症患者若不能及时、正确用药，容易危及生命。然而，临床常规的生化指标分析无法对患者所感染的病原体做出准确鉴定，大多数临床治疗仍处于经验用药阶段，在使用高级抗生素方面存在较大的盲目性。目前临床上流行使用的鉴定病原体的方法主要是依靠细菌培养检测法，但是细菌培养检测法存在较大的缺陷：检测时间长(一般2-3天左右)、准确率低(假阴性率和假阳性率都较高)、难以检测出难培养的病原体等。

环介导等温扩增技术(Loopmediated isothermal amplification，以下简称LAMP法)LAMP是2000年开发的一种恒温核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶在等温条件(60-65℃)保温30-60分钟，即可完成核酸扩增反应。LAMP具有简便、快速、灵敏、特异的优势，尤其适合在基层开展LAMP试剂盒的应用推广。LAMP技术中，引物是决定检测结果灵敏度和特异性的关键因素。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种用于检测感染性腹泻病原体的引物组合物及其试剂盒，以用于快速准确地鉴定感染性腹泻病原体的种类。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一方面，本发明提供一种用于检测感染性腹泻病原体的引物组合物，其包括包括轮状病毒引物组、肠道腺病毒引物组、诺如病毒引物组、沙门氏菌引物组、志贺氏菌引物组和空肠弯曲菌引物组中的至少一组；

其中，所述轮状病毒引物组包括SEQ ID NO：1所示的轮状病毒引物F3、SEQ ID NO：2所示的轮状病毒引物B3、SEQ ID NO：3所示的轮状病毒引物FIP和SEQ ID NO：4所示的轮状病毒引物BIP；

其中，所述肠道腺病毒引物组包括SEQ ID NO：5所示的肠道腺病毒引物F3、SEQ IDNO：6所示的肠道腺病毒引物B3、SEQ ID NO：7所示的肠道腺病毒引物FIP和SEQ ID NO：8所示的肠道腺病毒引物BIP；