[发明专利]一种检测感染性腹泻病原体的引物组合物及其试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测感染性腹泻病原体的引物组合物，其特征在于，包括轮状病毒引物组、肠道腺病毒引物组、诺如病毒引物组、沙门氏菌引物组、志贺氏菌引物组和空肠弯曲菌引物组；

其中，所述轮状病毒引物组包括SEQ ID NO：1所示的轮状病毒引物F3、SEQ ID NO：2所示的轮状病毒引物B3、SEQ ID NO：3所示的轮状病毒引物FIP和SEQ ID NO：4所示的轮状病毒引物BIP；

其中，所述肠道腺病毒引物组包括SEQ ID NO：5所示的肠道腺病毒引物F3、SEQ ID NO：6所示的肠道腺病毒引物B3、SEQ ID NO：7所示的肠道腺病毒引物FIP和SEQ ID NO：8所示的肠道腺病毒引物BIP；

其中，所述诺如病毒引物组包括SEQ ID NO：9所示的诺如病毒引物F3、SEQ ID NO：10所示的诺如病毒引物B3、SEQ ID NO：11所示的诺如病毒引物FIP和SEQ ID NO：12所示的诺如病毒引物BIP；

其中，所述沙门氏菌引物组包括SEQ ID NO：13所示的沙门氏菌引物F3、SEQ ID NO：14所示的沙门氏菌引物B3、SEQ ID NO：15所示的沙门氏菌引物FIP和SEQ ID NO：16所示的沙门氏菌引物BIP；

其中，所述志贺氏菌引物组包括SEQ ID NO：17所示的志贺氏菌引物F3、SEQ ID NO：18所示的志贺氏菌引物B3、SEQ ID NO：19所示的志贺氏菌引物FIP和SEQ ID NO：20所示的志贺氏菌引物BIP；

其中，所述空肠弯曲菌引物组包括SEQ ID NO：21所示的空肠弯曲菌引物F3、SEQ IDNO：22所示的空肠弯曲菌引物B3、SEQ ID NO：23所示的空肠弯曲菌引物FIP和SEQ ID NO：24所示的空肠弯曲菌引物BIP。

2.根据权利要求1所述的用于检测感染性腹泻病原体的引物组合物，其特征在于，进一步包括内对照引物组，所述内对照引物组用于扩增人血红蛋白-β链；

其中，所述内对照引物组包括SEQ ID NO：25所示的内对照引物F3、SEQ ID NO：26所示的内对照引物B3、SEQ ID NO：27所示的内对照引物FIP和SEQ ID NO：28所示的内对照引物BIP。

3.一种含有权利要求1或2所述的引物组合物的试剂盒，其特征在于，还包括微流控芯片，所述微流控芯片设有互不连通的4个反应检测区，每一反应检测区均包括依次连通的进样池、分配池、毛细管微阀和扩增池，每个反应检测区具有8个扩增池，所述引物组合物中的每一引物组分别包被于对应的扩增池中。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，在每一扩增池中，每一引物组中引物F3的浓度为1～4μM，引物B3的浓度为1～4μM，引物FIP的浓度为8～15μM，引物BIP的浓度为8～15μM。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括恒温扩增反应液、恒温扩增酶溶液、阴性对照物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述恒温扩增反应液包括200～250mMTris-HCl、300～400mM KCl、8～10mM dNTP、100～120mM MgSO4、1％～5％(W/V)Tween-20、40％～50％(W/V)甘油、1～5％(W/V)PEG8000和10～20mM指示剂；所述恒温扩增酶溶液包括10～12U/μL DNA聚合酶和20～30U/μL逆转录酶。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述指示剂包括HNB、Calcein、甲酚红、酚红、间甲酚紫、溴甲酚紫、中性红、萘酚酞、百里酚蓝。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶，所述逆转录酶为浓度为M-MLV逆转录酶。