[发明专利]一种核酸提取方法及其提取试剂

说明书

技术领域：

本发明涉及一种生物检测方法及其试剂，特别涉及一种核酸提取方法及其提取试剂。

背景技术

现有的核酸提取试剂与方法主要有酚－氯仿抽提法、碱裂解法、CTAB抽提法、磁珠法、二氧化硅基质法等，利用这些方法在提取核时，大多需要温浴、抽提、转管、清洗、离心等步骤，需要转门的仪器设备，同时需时约40分钟－2小时，另外容易造成样本间污染。

为了解决核酸提取步骤繁琐、耗时长、样本间易交叉污染的问题，为现场或仪器设备不全的实验室提供简单快速的核酸提取试剂与方法，本发明提供一种核酸提取方法及其提取试剂，本发明的方法可以实现核酸提取在5分钟内完成，达到节约时间的目的；另外只需要一管式核酸提取，不转管。达到避免交叉污染的目的。

发明内容

本发明提供一种核酸提取方法，所述方法包括以下步骤：

样本与提取试剂按比例混匀，于85-95℃裂解3-5min，裂解期间弹匀1-2次；待颗粒沉降后，上清即为释放的核酸；其中所述提取试剂包括：Tris，EDTA，3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸、NP－40，Tween-20,Chelex-100，水；其中Tris的浓度为5-10mM；EDTA的浓度为5-10mM；3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸的体积百分含量浓度为0.005％-0.02％；NP－40的百分含量浓度为0.01％－0.2％；Tween-20体积百分含量浓度为0.01-0.2％；Chelex-100的体积含量为1－20％；所述提取试剂PH为6－9。

根据本发明的方法，对于鼻咽拭子、肛拭子、痰液、唾液、血清、血浆、全血、尿液类样本，直接取样与提取试剂按比例混匀，于90℃裂解4min，裂解期间弹匀1次。

根据本发明的方法，对于干血斑、精斑样本，先用1×TE溶解后混匀，与提取试剂按比例混匀，90℃裂解4min，裂解期间弹匀1次。

根据本发明的方法，对于粪便样本：建议水样便采取200μl，成形便采取黄豆大小的粪量，加入500μl生理盐水，5000rpm离心2min，转移30－50μl上清至另一干净、无核酸酶的EP管中。13000rpm离心1-2min，弃上清，沉淀中加入50μl核酸提取液，漩涡震荡20S，90℃裂解4min，裂解期间弹匀1次。待颗粒沉降后，上清即为释放的核酸，可以进行后续的PCR扩增。

其中，样本与提取试剂的体积比为50:10-50

本发明进一步提供一种提取试剂，包括以下组分：Tris，EDTA，3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸、NP－40，Tween-20,Chelex-100，水(优选DEPC水)。其中Tris的浓度为5-10mM；EDTA的浓度为5-10mM；3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸的体积百分含量浓度为0.005％-0.02％；NP－40的百分含量浓度为0.01％－0.2％；Tween-20体积百分含量浓度为0.01-0.2％；Chelex-100的体积含量为1－20％；所述提取试剂PH为6－9。

本发明提取试剂的配制方法如下：

先用水溶解Tris与EDTA，Tris的浓度为5-10mM；EDTA的浓度为5-10mM；调PH到6－9，Tris与EDTA溶液中加入3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸，使体积百分含量浓度为0.005％-0.02％；加入NP－40，使百分含量浓度为0.01％－0.2％；加入Tween-20，使体积百分含量浓度为0.01-0.2％；加入Chelex-100，使体积含量为1－20％，混合均匀即得。

本发明进一步提供一种试剂盒，包括以下试剂：Tris，EDTA，3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸、NP－40，Tween-20,Chelex-100，水(优选DEPC水)。其中Tris的浓度为5-10mM；EDTA的浓度为5-10mM；3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸的体积百分含量浓度为0.005％-0.02％；NP－40的百分含量浓度为0.01％－0.2％；Tween-20体积百分含量浓度为0.01-0.2％；Chelex-100的体积含量为1－20％；所述提取试剂PH为6－9。

本发明所述的试剂盒，包括：盒体、盒体内的试剂，试剂槽，说明书，所述试剂放置在试剂槽中。

本发明的试剂盒，各试剂分别包装，优选使用包装管，每个包装管中装入试剂的量以够一个样本使用量为基本量，可以扩大到10个，100个，1000个样本的使用量。