[发明专利]一种基于鲟鱼软骨活性成分的关节修复组合物及其制备方法

权利要求书

1.基于鲟鱼软骨活性成分的关节修复组合物的制备方法，其特征在于：

所述关节修复组合物成份及其重量份为鲟鱼软骨II型胶原蛋白850g、鲟鱼软骨硫酸软骨素50g、氨基葡萄糖100g、酪蛋白钙5g、白桦脂酸0.02g和人寡肽-1 0.01g；

包括以下步骤：

1)脱脂：将鲟鱼软骨组织破碎后按料液比1:10～25w/v加入0.08~0.14mol/L的NaOH溶液，于2~5℃条件下搅拌18～36h，NaOH溶液每4～8h更换一次，离心取沉淀，洗涤后加入正丁醇溶液，浸泡并过滤；

2)脱钙：向步骤1最后得到的固形物中按料液比1:10~20w/v加入EDTA-2Na溶液，浸泡18~30h，EDTA-2Na溶液每3～6h更换一次，EDTA-2Na溶液的浓度为0.42~0.49mol/L，pH为7.0~8.0，离心取沉淀后洗涤，干燥；

3)提取：在步骤2最后得到的软骨中加入按料液比1:10~25w/v加入0.46~0.54mol/L的乙酸溶液，加入的猪胃蛋白酶酶活度大于3800U/g，加入量为软骨重量的2.5～3.0%，于2~5℃条件下搅拌提取48～72h，离心取沉淀物，在沉淀物中加入乙酸溶液和猪胃蛋白酶，搅拌提取，离心取上清液；

4)透析：将步骤3最后得到的上清液装入透析袋，并放入Tris-HCl磷酸缓冲液中，并在缓冲液中加入NaCl，透析至析出絮状沉淀，离心取沉淀物，将所得沉淀用乙酸溶液复溶后蒸馏水透析，将透析液冷冻干燥得到鲟鱼软骨II型胶原蛋白；

5)超声波辅助酶解处理：在步骤3最后得到的沉淀物中加入Tris-HCl缓冲液和胰蛋白酶，在超声波辅助作用下水解，离心取上清液；

6)透析：将步骤5最后得到的上清液浓缩并装入透析袋，用蒸馏水透析，在透析液中加入乙醇，再逐渐加入NaOH，低温静置后离心取沉淀物，将沉淀转移至透析袋中，用蒸馏水透析，将透析液干燥得鲟鱼软骨硫酸软骨素；

7)成品：按配方量混合鲟鱼软骨II型胶原蛋白、鲟鱼软骨硫酸软骨素、氨基葡萄糖和酪蛋白钙，制成制剂，得到一种基于鲟鱼软骨活性成分的关节修复组合物。

2.根据权利要求1所述的一种基于鲟鱼软骨活性成分的关节修复组合物的制备方法，其特征在于：所述的步骤4中Tris-HCl磷酸缓冲液浓度为0.046~0.053mol/L，pH为7.2~7.8，添加NaCl至溶液最终浓度为2.6～3.0mol/L，透析24～36h至析出絮状物沉淀。

3.根据权利要求1所述的一种基于鲟鱼软骨活性成分的关节修复组合物的制备方法，其特征在于：所述的步骤5中Tris-HCl缓冲液浓度为0.046~0.053mol/L，pH为7.8~8.5，加入的胰蛋白酶为软骨重量的0.3～1.0%，超声波功率为300～500W，45～55℃水解2～4h。

4.根据权利要求1所述的一种基于鲟鱼软骨活性成分的关节修复组合物的制备方法，其特征在于：所述的步骤6中蒸馏水透析36～54h，透析液按体积加入1.0～1.5倍v/v90~98%的乙醇，再逐渐加入NaOH至其浓度为0.5～1.0mol/L，于2~5℃下静置12～16h。