[发明专利]一种以水蓼为原料发酵植物促生菌在抗虫中的应用

说明书

技术领域

一种微生物发酵制备杀虫剂的方法，涉及到用市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47冻干粉，以水蓼为原料发酵制备杀虫剂的方法，属于生物工程及发酵技术领域。

背景技术

水蓼是蓼科一年生草本植物，水蓼高20-80cm，直立或下部伏地。茎红紫色，无毛，节常膨大具须根，叶互生，披针形或椭圆状披针形，长4-9cm，宽5-15mm，两端渐尖，均有腺状小点，无毛或叶脉及叶缘上有小刺状毛；托鞘膜质，简状，有短缘毛；叶柄短。穗状花序腋生或顶生，细弱下垂，下部的花间断不连；苞漏斗状，有疏生小脓点和缘毛；花具细花梗而伸出苞外，间有1-2朵花包在膨胀的托鞘内；花被4-5裂，卵形或长圆形，淡绿色或淡红色，有腺状小点；雄蕊5-8；雌蕊1，花柱2-3裂。瘦果卵形，扁平，少有3棱，长2.5毫米，表面有小点，黑色无光，包在宿存的花被内。花期7-8月。我国大部分地区均有分布，生长于湿地、水边或水中。水蓼全草含水蓼二醛，异水蓼二醛，密叶辛木素，水蓼酮，水蓼素-7-甲醚，水蓼素，槲皮素，槲皮甙，槲皮黄甙，金丝桃甙，顺/反阿魏酸，顺/反芥子酸，香草酸，丁香酸，草木犀酸，顺/反对香豆酸，对羟基苯甲酸，龙胆酸，顺/反咖啡酸，原儿茶酸，没食子酸，对羟基苯乙酸，绿原酸，水杨酸，并没食子酸，缬草酸，葡萄糖醛酸，焦性没食子酸，槲皮素-7-O-葡萄糖甙，β-谷甾醇葡萄糖甙，异水蓼醇醛，水蓼醛酸，11-乙氧基桂皮内酯，11-羟基密叶辛木素(valdiviolide)，7，11-二羟基密叶辛木素，八氢三甲基萘醇二醛，八氢三甲基萘甲醇，异十氢三甲基萘并呋喃醇,花白甙等次生代谢产物，也发现水蓼提取物具有一定的杀菜青虫的作用。但传统的植物性杀虫剂多用有机溶剂或煎煮提取，1)不利于节能也有较大的环境风险；2)影响活性物质的稳定性和遗失活性物质；3)增加成本使得开发应用困难较大，作用效果缓慢，因此给植物源杀虫剂的研发和生产带来了巨大的经济困难。利用合适的植物促生菌发酵水蓼，不仅有利于生理活性物质的提取，还不易造成活性物质的失活，促生菌本身还有较好的杀虫防病和促生作用。有利于改善植物生长和增强杀虫效果。有利于环境保护和水蓼本身的有效利用。

发明内容

本发明利用水蓼的丰富资源，通过微生物进行发酵产生各种次级代谢物及植物促生菌产生酶类、醇类及芳香物质等多类有义代谢产物从而提高杀虫剂的药效及其功能，本发明拥有着发酵时间短，有害微生物滋生少甚至没有，避免由于过长时间发酵而产生的病毒，以及能产生脂肽等生理活性物质等优点，从而提高杀虫防病的功效和植物生长的促生作用。

本发明配方及用法：

(1)挑选材料：选择新鲜、质量好的水蓼1kg/L为发酵主原料。

(2)材料的处理：先用自来水冲洗，再使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水清水洗两遍，最后再用0.9％的NaCl溶液侵泡120秒，沥干备用。

(3)菌种培养：使用无锡百年尚水饮品有限公司提供的百年尚水配制LB培养基，将原保存菌株活化，培养约48小时得到的菌液备用；

(4)接种发酵：均按照接种比例3％，将市售短小芽孢杆菌、苏云杆菌和解淀粉芽孢杆菌H47按一定的比例接入发酵原液，各菌浓度为10⁶CFU/ml，发酵3～9d，转速为100～200r/min,pH值5.0～8.0，温度25℃～35℃。

(5)后期处理制作：粗过滤，初步筛掉大颗粒残渣，避免水蓼久放容易造成酸败，过滤条件：过滤筛数目为20～32目。细过滤：进一步滤掉小型颗粒残渣，使液态呈现较清澈的状态，过滤条件：过滤筛数目为80～100目，既得以水蓼发酵原料的杀虫剂。

步骤(1)原料的制备方法包括如下步骤：

(11)所使用的工具、器具均要灭菌，无油腻。

(12)把水蓼用纯净水洗净，再用纯净水或0.9％的盐水浸泡沥干。

(13)再将水蓼置于已灭菌的容器中，后加入生活垃圾及淀粉类物质和纯净水，其中发酵原液中体积比水蓼：生活垃圾：淀粉类物质:纯净水＝5:1～2:0.01:3～4，即得水蓼发酵原液。

发明的有益效果：

本利用合适的植物促生菌发酵水蓼，不仅有利于生理活性物质的提取，保持活性物质的稳定性，促生菌本身可通过优势菌株抑制了其他杂菌滋生从而有较好的杀虫防病和促生作用。有利于改善植物生长和增强杀虫效果。有利于环境保护和水蓼植物本身的有效利用。提高杀虫剂的经济价值。

具体实施方式